申请/专利权人：珠海市金同农产品有限公司;仲恺农业工程学院;拱北海关技术中心

申请日：2023-09-19

公开（公告）日：2023-12-29

公开（公告）号：CN117305425A

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869;C12Q1/06;C12R1/01;C12R1/44;C12R1/225;C12R1/38;C12R1/645;C12R1/425

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.16#实质审查的生效;2023.12.29#公开

摘要：本发明公开了一种鉴定酱卤乳鸽储藏过程中特定腐败菌的方法，包括对储藏过程中的酱卤乳鸽进行间隔取样，获得不同储藏时期的样品；所述样品置于带滤膜的无菌袋中，加入无菌生理盐水浸泡后进行多次离心操作，将下层菌体沉淀转移至冻存管中保存；高通量测序；微生物分离纯化和微生物鉴定等过程。本发明解决了酱卤乳鸽中菌群复杂、储藏过程中不断变化、特定腐败菌难以鉴定的问题，获得了测定范围广、结果准确和精度高等技术效果，方便用于判断酱卤乳鸽的储藏期和食用安全性。

主权项：1.一种鉴定酱卤乳鸽储藏过程中特定腐败菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1取样对储藏过程中的酱卤乳鸽进行间隔取样，获得不同储藏时期的样品；2处理所述样品置于带滤膜的无菌袋中，加入无菌生理盐水浸泡后进行多次离心操作，将下层菌体沉淀转移至冻存管中保存；3高通量测序采用PCR扩增技术对16SrDNAV3-V4区进行扩增，所用的引物序列为341F5’-CCTACGGGNGGCWGCAG-3’和805R5’-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3’；4微生物分离纯化从菌落计数结束后生长数目在30-300CFU的平板，根据菌落特征，从每种培养基上挑取5-10个菌落，采用平板划线的方式接种于相应的培养基上，重复多次，直到得到纯化的单菌落；再通过革兰氏染色、显微镜镜检和过氧化氢酶试验进行初步筛选，挑取的纯菌落富集后，保存备用。5微生物鉴定将步骤4中的纯菌落进行DNA提取、16SrDNAV3-V4区PCR扩增及测序，上游引物为27F5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，下游引物为1492R5’-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3’。

全文数据：

权利要求：

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