申请/专利权人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所

申请日：2021-06-30

公开（公告）日：2024-01-02

公开（公告）号：CN113406330B

主分类号：G01N33/58

分类号：G01N33/58;G01N33/543

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.02#授权;2021.10.08#实质审查的生效;2021.09.17#公开

摘要：本发明涉及食品安全检测免疫分析技术领域，更具体地，涉及一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法。试剂盒包括：诺氟沙星‑生物素标记物、诺氟沙星多克隆抗体、修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶、金纳米粒子、抗坏血酸磷酸、硫酸铜溶液和铜离子探针，金纳米粒子包括连接有叠氮基的金纳米粒子和连接有炔基的金纳米粒子。本发明技术具有灵敏度高、检测范围宽、操作简单、特异性好等优点，对诺氟沙星的超灵敏检测具有重要的实际意义，对于实现现场快速、超灵敏侦检技术具有很好的指导意义。

主权项：1.一种用于检测诺氟沙星的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：（1）诺氟沙星-生物素标记物；（2）诺氟沙星多克隆抗体；所述诺氟沙星多克隆抗体包被于多孔板上；（3）修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶；（4）金纳米粒子；所述金纳米粒子包括连接有叠氮基的金纳米粒子和连接有炔基的金纳米粒子，所述金纳米粒子用于检测一价铜离子；（5）抗坏血酸磷酸；（6）硫酸铜溶液；（7）铜离子探针；所述铜离子探针用于检测二价铜离子；所述连接有叠氮基的金纳米粒子和所述连接有炔基的金纳米粒子的摩尔比为1：1；所述诺氟沙星-生物素标记物中，每1mg诺氟沙星上标记有生物素0.02~0.06mg；所述诺氟沙星-生物素标记物的浓度为0.6~1mgmL；所述多孔板上诺氟沙星多克隆抗体包被量为50~200μg孔；所述抗坏血酸磷酸的浓度为1~3mM；所述硫酸铜溶液的浓度为1~3mM；所述铜离子探针的浓度为10~30μM；所述试剂盒中还含有诺氟沙星标准品，所述诺氟沙星标准品的浓度为10-6pgmL~107pgmL；所述诺氟沙星-生物素标记物用于与所述诺氟沙星多克隆抗体结合，且用于与所述修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶结合；所述修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶用于还原所述抗坏血酸磷酸为抗坏血酸，所述抗坏血酸用于将所述硫酸铜溶液中的二价铜离子还原为一价铜离子；所述试剂盒的检测方法，至少包括以下步骤：S1、将诺氟沙星多克隆抗体包被于多孔板上；所述多孔板上诺氟沙星多克隆抗体包被量为50~200μg孔；S2、将诺氟沙星标准品每个梯度浓度各50μL和诺氟沙星-生物素标记物50μL混合，加入到多孔板上，36~38℃条件反应45~75分钟；S3、加入修饰有链霉亲和素的碱性磷酸酶100μL体积，36~38℃条件反应20~40分钟；S4、加入抗坏血酸磷酸100μL，36~38℃条件反应45~75分钟；S5、加入硫酸铜溶液100μL，室温条件反应7~15分钟；S6、取100μL由S5中得到的反应液加入铜离子探针100μL，检测荧光信号，并绘制标准曲线，取50μL由S5中得到的反应液加入金纳米粒子混合液160μL体积，检测可视化信号，并制备颜色变化图；S7、将检测得到的各梯度浓度荧光信号绘制标准曲线，将检测得到的各梯度浓度可视化信号制备颜色变化图；S8、将待测样品分别稀释103、稀释106和稀释109倍，将待测样品原液及稀释后的待测样品，用S2~S7的方法进行检测，当其中一个稀释倍数的荧光值出现在标准曲线上时，带入标准曲线计算待测物浓度，并将颜色变化与颜色变化图进行比较。

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权利要求：

百度查询： 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 一种用于检测诺氟沙星的试剂盒及检测方法

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