申请/专利权人：上海锐赛循益生物技术有限公司

申请日：2023-12-05

公开（公告）日：2024-01-05

公开（公告）号：CN117343999A

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.23#实质审查的生效;2024.01.05#公开

摘要：本发明公开了一种基于左侧探针退火和右侧探针退火延伸的核酸扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：S1用于准备左侧自由探针、右侧自由探针和模板核酸的步骤；S2用于在试管L中生成退火后左侧探针Lp，并立即冰水浴的步骤；S3用于在试管R中生成退火后右侧探针Rp，并进行一次延伸生成退火延伸后右侧探针Rp’，之后立即冰水浴的步骤；S4用于对试管L和试管R进行分选纯化的步骤；S5用于对步骤S4中的试管L和试管R分选纯化后的产物进行PCR扩增的步骤。本发明所公开的基于左侧探针退火和右侧探针退火延伸的核酸扩增方法，扩增的核酸产物浓度高，步骤简单实验成本低、耗时短，且适用于检测探针之间的核酸序列。

主权项：1.一种基于左侧探针退火和右侧探针退火延伸的核酸扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：S1用于准备带有通用引物结合位点的左侧自由探针、带有通用引物结合位点的右侧自由探针和模板核酸的步骤；S2用于在试管L中将左侧自由探针和模板核酸进行退火程序生成退火后左侧探针Lp，并立即冰水浴的步骤；S3用于在试管R中将右侧自由探针和模板核酸进行退火程序生成退火后右侧探针Rp，并用具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶进行一次延伸生成退火延伸后右侧探针Rp’，之后立即冰水浴的步骤；S4用于对试管L和试管R分别用DNA分选磁珠进行分选纯化的步骤；S5用于对步骤S4中的试管L和试管R分选纯化后的产物进行PCR扩增的步骤；所述S2用于在试管L中将左侧自由探针和模板核酸进行退火程序生成退火后左侧探针Lp，并立即冰水浴的步骤，包括：S21用于对试管L进行高温变性，温度为90-100摄氏度，时间为3-10分钟；S22用于对高温变性后的试管L进行低温退火，温度为50-72摄氏度，时间为1-60分钟；S23用于对低温退火后的试管L进行冰水浴，时间为1-60分钟；所述S3用于在试管R中将右侧自由探针和模板核酸进行退火程序生成退火后右侧探针Rp，并用具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶进行一次延伸生成退火延伸后右侧探针Rp’，之后立即冰水浴的步骤，包括：S31用于对试管R进行高温变性，温度为90-100摄氏度，时间为3-10分钟；S32用于对高温变性后的试管R进行低温退火，温度为50-72摄氏度，时间为1-60分钟；S33用于向低温退火后的试管R中使用具有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶进行一次延伸，保持温度为65-72摄氏度，时间为5-60秒；S34用于将延伸后的试管R进行冰水浴，时间为1-60分钟。

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权利要求：

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