申请/专利权人：华南农业大学

申请日：2021-11-10

公开（公告）日：2024-01-23

公开（公告）号：CN114164291B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.23#授权;2022.03.29#实质审查的生效;2022.03.11#公开

摘要：本发明公开水稻粒长基因GL10等位基因的应用，属于植物基因育种应用技术领域。本发明利用自然变异群体图位克隆了一个新的水稻粒长基因GL10，该基因作为一个正调控因子参与水稻粒型调控。利用CRISPRCas9技术敲除GL10将导制水稻籽粒明显变短；过量表达GL10将导致水稻籽粒的明显增长。利用自然变异等位基因特点开发出功能标记，可直接用于GL10的等位基因鉴定。本发明有助于更好地了解GL10的作用机制，GL10的克隆为进一步了解水稻粒型遗传调控网络奠定理论基础，自然变异等位基因在育种中有较大的应用价值。

主权项：1.敲除或过表达水稻粒长基因GL10等位基因的试剂的应用，其特征在于：所述等位基因为等位基因GL10HJX74，其核苷酸序列如网址为https:rapdb.dna.affrc.go.jp的RAP-DB数据库登录号为：Os10g0536100的序列所示；和等位基因GL10Lemont，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；所述应用为如下应用A和B中的任意一种或多种：A.在调控水稻粒长中的应用；B.在水稻粒形改良育种中的应用；在含有等位基因GL10HJX74的水稻中敲除等位基因GL10HJX74，水稻粒长变短；在含有等位基因GL10Lemont的水稻中过表达等位基因GL10HJX74，水稻粒长增长；所述敲除等位基因GL10HJX74采用的敲除载体的构建方法如下：根据等位基因GL10HJX74序列设计两对靶点引物，分别连接上SK-gRNA，获得质粒后第一个靶点质粒用KpnI和NheI进行酶切回收，第二个靶点质粒用XbaI和BglII进行酶切回收；PC1300-Cas9载体用KpnI和BamHI限制性内切酶进行酶切回收；将酶切后的两靶点质粒连接到PC1300-Cas9载体上，即获得所述敲除载体；两对靶点引物的序列分别为：KO-MS1-F：5'-ggcATGAGAACCCGACGAGCCGGC-3'；KO-MS1-R：5'-aaacGCCGGCTCGTCGGGTTCTCA-3'；KO-MS2-F：5'-ggcACTCCGTCCTCTGCGACGCCG-3'；KO-MS2-R：5'-aaacCGGCGTCGCAGAGGACGGAG-3'；所述过表达等位基因GL10HJX74采用的过表达载体的构建方法如下：以华粳籼74的cDNA为模板进行扩增，扩增产物与SpeI和MIuI双酶切的PXQ-35S载体进行连接，即获得所述过表达载体；扩增所用的引物序列为：OE-MS-F：5'-GGGGTACCATGGTGCGGGGGAGGACGGAG-3'；OE-MS-R：5'-CGGGATCCTCAACCTGTCTCCGACCGGTT-3'。

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权利要求：

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