申请/专利权人：山东省农业科学院

申请日：2023-04-25

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN116637141B

主分类号：A61K36/744

分类号：A61K36/744;C12P1/04;A61P19/06;C12P17/06;C12P17/16;C12P17/18;C12P7/26;C12P7/42;C12P7/22;C12R1/25;C12R1/23;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2023.09.12#实质审查的生效;2023.08.25#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于微生物发酵得栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏的方法。该方法通过以下步骤实现：（1）复苏菌株后于灭菌后的MRS培养基中培养得种子液；（2）将栀子粉和蒸馏水混合后灭菌，然后将混合浆料接种种子液，接种后进行厌氧发酵，将发酵液过滤浓缩得栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏。本发明利用微生物发酵转化技术和质谱分子网络，开展以抑制XOD酶活性为导向的天然产物发现研究，为天然来源治疗高尿酸血症药物先导化合物的发现探索新途径，对本学科的发展具有重要的科学价值和现实意义。

主权项：1.一种基于微生物发酵得栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）复苏菌株后于灭菌后的MRS培养基中培养得种子液；所述菌株为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和长双岐杆菌；所述培养为37℃培养1d；（2）将栀子粉和蒸馏水混合后灭菌得混合浆料，然后将混合浆料接种种子液，接种后进行厌氧发酵得发酵液，将发酵液过滤浓缩得栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏；所述栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏中，栀子降尿酸代谢产物的分离方法为：将发酵液过滤浓缩得栀子降尿酸代谢产物发酵浸膏，将发酵浸膏分散在10倍体积的水中，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个组分，经过XOD酶活性导向，对乙酸乙酯部位通过正反硅胶柱色谱和HPLC半制备柱分离纯化，得栀子降尿酸代谢产物；所述栀子降尿酸代谢产物，乙酸乙酯部位具体分离纯化过程为：（a）将乙酸乙酯部位通过200-300目的硅胶柱分离，并用CH2Cl2MeOH逐步洗脱产生六个组分Fr1-Fr6；所述CH2Cl2MeOH逐步洗脱的比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:5、0:1；（b）Fr2通过200-300目硅胶柱经石油醚乙酸乙酯洗脱和SephadexLH-20分离后，再用半制备型HPLC制备得到apigenin、luteolin、isorhamnetin和methylophiopogononeA；所述石油醚乙酸乙酯的洗脱比例为2:1；所述SephadexLH-20为MeOHCH2Cl2=11；所述半制备型HPLC的参数为：MeOHH2O=6040；（c）Fr3通过200-300目硅胶柱经石油醚乙酸乙酯洗脱和SephadexLH-20分离后，由半制备型HPLC制备得到blumenolA和ferulicacid；所述石油醚乙酸乙酯的洗脱比例为3:2；所述SephadexLH-20为MeOHCH2Cl2=11；所述半制备型HPLC的参数为：MeOHH2O=5050；（d）Fr4通过200-300目硅胶柱经石油醚乙酸乙酯洗脱和SephadexLH-20后，由半制备型HPLC制备得到lyoniresinol和salicifoliol；所述石油醚乙酸乙酯的洗脱比例为1:1；所述SephadexLH-20为MeOHCH2Cl2=11；所述半制备型HPLC的参数为：MeOHH2O=4060。

全文数据：

权利要求：

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