申请/专利权人：济南国科医工科技发展有限公司

申请日：2020-09-15

公开（公告）日：2024-02-06

公开（公告）号：CN112067826B

主分类号：G01N33/74

分类号：G01N33/74;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/531

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.06#授权;2020.12.29#实质审查的生效;2020.12.11#公开

摘要：本发明公开了一种基于高比活力碱性磷酸酶构建的NT‑proBNP检测试剂盒及其应用，属于免疫化学检测技术领域。本发明对酶‑抗体以及磁珠‑抗体的连接方法进行了优化，大大降低了酶和磁珠对抗原‑抗体之间结合的影响，极大提高了检测灵敏度；同时采用比活力更高的碱性磷酸酶CmAP代替现有商品化的碱性磷酸酶BIAP，使检测的灵敏度得到进一步的提高。为心力衰竭的早期诊断和治疗提供更及时、可靠的信息。

主权项：1.一种NT-proBNP检测试剂盒，其特征在于，包括：碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体和磁珠包被的NT-proBNP包被抗体；所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体由如下方法制备而成：将NT-proBNP检测抗体与高碘酸钠反应，使抗体Fc端上的糖链氧化生成醛基，得到第一产物；将第一产物用过量的半胱氨酸盐酸盐与氰基硼氢化钠处理，使醛基与半胱氨酸盐酸盐发生醛胺缩合反应，抗体Fc端生成有活性的巯基；将碱性磷酸酶用SMCC处理，暴露出有活性的马来酰胺基团；然后与Fc端生成有活性巯基的NT-proBNP检测抗体混合，使巯基与马来酰胺反应生成稳定的硫醚键；再用NEM溶液封闭反应，除盐，制备得到碱性磷酸酶标记的NT-proBNP检测抗体；所述磁珠包被的NT-proBNP包被抗体由如下方法制备而成：将NT-proBNP包被抗体与高碘酸钠反应，使抗体Fc端上的糖链氧化生成醛基，得到第二产物；将第二产物与生物素-LC-酰肼试剂反应，酰肼基团与醛基反应生成稳定的腙键，使抗体的Fc端修饰上生物素；将链霉亲和素修饰的磁珠与Fc端修饰有生物素的NT-proBNP包被抗体混合，生物素与链霉亲和素反应生成稳定的共价键，即制备得到磁珠包被的NT-proBNP包被抗体。

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权利要求：

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