申请/专利权人：苏州翊讯生物科技有限公司

申请日：2020-03-10

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN111289758B

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.09#授权;2020.07.10#实质审查的生效;2020.06.16#公开

摘要：本发明公开了一种用于H‑FABP定量检测的试剂盒及一种H‑FABP定量检测的方法。本发明的用于H‑FABP定量检测的试剂盒包括试剂条，在试剂条上包含有若干容纳槽体，本发明的试剂盒还包括分别预存于不同的容纳槽体中的磁微粒试剂、标记试剂、清洗液和碱性磷酸酶的发光底物，磁微粒试剂由抗H‑FABP一抗包被的磁珠制备得到，标记试剂由经过活化处理的抗H‑FABP二抗和经过活化处理的碱性磷酸酶制备得到。利用本发明的试剂盒进行检测时，操作简单，出结果快，且检测结果准确，检测精密度高。

主权项：1.一种用于H-FABP定量检测的试剂盒，其特征在于，包括至少一根试剂条，在每根所述试剂条上包含有若干容纳槽体，所述试剂盒还包括分别预存于不同的容纳槽体中的磁微粒试剂、标记试剂和发光底物，所述磁微粒试剂由抗H-FABP一抗包被的磁珠制备得到，所述标记试剂由抗H-FABP二抗和碱性磷酸酶制备得到，所述磁微粒试剂按如下方法制备：将1mg抗H-FABP一抗和100mgMS-300的磁珠以及10mgEDC混合，在37℃孵育2小时,集磁、去上清，加入封闭剂CE210，常温孵育1H，集磁、去上清，加入1ml磁珠保存液即制备得到磁微粒试剂半成品；将制备得到的磁微粒试剂半成品与磁珠缓冲液按体积比为1：50混合均匀，即制备得到磁微粒试剂；所述磁珠缓冲液的配方为：4.58gLTRIS、6.81gLNaCl、0.1%吐温20、3gLBSA、0.02%Proclin-300,pH8.0；所述抗H-FABP二抗为经活化的抗H-FABP二抗，按如下步骤进行活化：将活化剂2-IT溶解于pH7.2的磷酸缓冲溶液中，配制浓度为1.367mgml的2-IT溶液，将2-IT与抗H-FABP二抗按质量比1：50混匀，充分活化反应15分钟，加入抗H-FABP二抗的2%质量份的甘氨酸，终止活化反应，然后，使用PD10柱脱盐去除多余的2-IT；所述碱性磷酸酶为经活化的碱性磷酸酶，按如下步骤进行活化：使用DMF配制浓度为1.367mgml的SMCC试剂，将SMCC试剂与碱性磷酸酶按质量比为1：50，混匀、活化反应15分钟，加入碱性磷酸酶的2%质量份的甘氨酸终止活化反应，使用PD10柱脱盐去除多余的SMCC；所述标记试剂按如下方法制备：将经活化的抗H-FABP二抗与经活化的碱性磷酸酶按质量比1：0.8混合，充分反应4H后，使用乙醇胺终止反应，再使用PD10柱脱盐去除多余的乙醇胺，再将经过充分连接的抗H-FABP二抗-碱性磷酸酶溶解于试剂酶缓冲液中，终体系中的抗H-FABP二抗浓度为1μgml，所述碱性磷酸酶为天然少糖碱性磷酸酶。

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