申请/专利权人：北京和合医学诊断技术股份有限公司

申请日：2022-09-09

公开（公告）日：2024-02-09

公开（公告）号：CN116183736B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86

优先权：["20220725 CN 2022108758229"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.09#授权;2023.06.16#实质审查的生效;2023.05.30#公开

摘要：本公开涉及一种同时检测肺泡灌洗液中9种抗生素的LC‑MSMS分析方法，1利用标准溶液分别建立9种抗生素的标准曲线；其中，所述9种抗生素包括头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑和伊曲康唑；2将肺泡灌洗液样品进行样品前处理，得到待测样品；3利用LC‑MSMS对待测样品进行检测，并利用步骤1确定的标准曲线确定待测样品中9种抗生素的含量。本公开提供的分析方法能够实现肺泡灌洗液中9种抗生素的同时检测，一份样本即可完成检测，并且本公开提供的分析方法重现性良好，加样回收率高，检测结果准确性高，检测过程简便快捷，分析时间短，实验成本低，有利于大批量的样本检测。

主权项：1.一种同时检测肺泡灌洗液中9种抗生素的LC-MSMS分析方法，其特征在于，所述方法包括：（1）利用标准溶液分别建立9种抗生素的标准曲线；其中，所述9种抗生素包括头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑和伊曲康唑；所述标准溶液的制备方法包括：将内标工作液与含有9种抗生素的标准工作液混合后，与蛋白沉淀剂混合，取上清液并利用超纯水稀释，得到所述标准溶液，所述标准工作液包括8个级别浓度；各所述级别浓度的标准工作液均利用稀释剂由中间液稀释得到，所述中间液利用稀释剂由母液稀释得到，所述母液利用溶剂溶解所述9种抗生素各自的标准品得到；在制备所述母液时：所述美罗培南标准品和头孢他啶标准品使用的溶剂各自独立地选自浓度为30-50%的甲醇水溶液；所述头孢哌酮和伊曲康唑标准品使用的溶剂独立地选自浓度为50-80%二氯甲烷的甲醇溶液；所述泊沙康唑标准品使用的溶剂选自浓度为60-100%的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中还含有0.4-1%的甲酸；所述利奈唑胺、氟康唑、哌拉西林、伏立康唑标准品使用的溶剂各自独立地选自浓度为70-90%的甲醇水溶液；所述稀释剂为甲醇水溶液，所述甲醇和水的体积比为3:7~5:5；所述9种抗生素使用的内标物包括头孢哌酮-D5、头孢他啶-D5、美罗培南-D6、利奈唑胺-D3、伏立康唑-D3、氟康唑-D4、哌拉西林-D5、泊沙康唑-D4和伊曲康唑-D5；在制备内标母液时：所述美罗培南-D6和头孢他啶-D5标准品使用的溶剂各自独立地选自浓度为30-50%的甲醇水溶液；所述头孢哌酮-D5和伊曲康唑-D5标准品使用的溶剂独立地选自浓度为50-80%二氯甲烷的甲醇溶液；所述泊沙康唑-D4标准品使用的溶剂选自浓度为60-100%的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中还含有0.4-1%的甲酸；所述利奈唑胺-D3、伏立康唑-D3、氟康唑-D4、哌拉西林-D5标准品使用的溶剂各自独立地选自浓度为70-90%的甲醇水溶液；（2）将肺泡灌洗液样品进行样品前处理，得到待测样品；所述前处理的方法包括：将肺泡灌洗液样品、内标工作液和蛋白沉淀剂混合，离心取上清液后加入超纯水进行稀释，得到所述待测样品，所述蛋白沉淀剂选自乙腈；（3）利用LC-MSMS对待测样品进行检测，并利用步骤（1）确定的标准曲线确定待测样品中9种抗生素的含量；在所述LC-MSMS分析方法中，液相色谱参数包括：使用的流动相：A为含有0.1-0.2vv%甲酸和1-5mM甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B为含有0-0.2vv%甲酸的乙腈；色谱柱为：phenomenexLunaOmegaPolarC18、phenomenexKinetexPolarC18或Shim-packVeloxSP-C18；梯度洗脱参数包括：0.00min：A95-100%，B0-5%；0.10-1.50min：A30-60%，B40-70%；1.51-3.00min：A0-10%，B100-90%；3.01-5.50min：A95-100%，B0-5%；质谱检测仪的检测模式为ESI+检测模式，质谱参数包括：干燥气温度：250-350℃；干燥气流速：3-15Lmin；鞘气温度：300-400℃；鞘气流速：8-11Lmin；喷雾器：40-50psi；毛细管电压3000-4500V。

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