申请/专利权人：武汉百翼生物科技有限公司

申请日：2022-03-15

公开（公告）日：2024-02-13

公开（公告）号：CN114525242B

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077;C12N5/074

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.13#授权;2022.06.10#实质审查的生效;2022.05.24#公开

摘要：本发明公开了一种诱导ipsc分化为心肌细胞的方法，涉及生物技术领域。所述方法包括以下步骤：S1ipsc细胞培养；S2诱导ipsc分化为心肌细胞。使用干细胞培养基培养ipsc生长至80％后，使用混合培养基培养，诱导ipsc分化呈中胚层前体细胞，然后再用抑制剂培养基培养，将细胞分化成类似心肌前体细胞，最后再用维持培养基培养，得到心肌细胞，所述混合培养基为含有Chir99021和白术内酯Ⅱ的基础培养基，所述基础培养基为含B27添加剂、LAA2P的RPMI1640培养基；所述抑制剂培养基为含有Wnt‑C59的基础培养基；所述维持培养基为基础培养基。本发明诱导ipsc分化为心肌细胞的方法，具有分化时间短3天即可见分化出跳动的心肌细胞，分化效率高7天分化效率高达85％的优点。

主权项：1.一种诱导ipsc分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1ipsc细胞培养：将iPSC克隆在包被过Matrigel的培养皿中培养，待回合度达70％～80％时，吸走干细胞培养基，然后进行洗涤、传代培养，37℃孵育3～5min；S2诱导ipsc分化为心肌细胞：使用干细胞培养基培养ipsc生长至80％后，使用混合培养基培养，诱导ipsc分化呈中胚层前体细胞，然后再用抑制剂培养基培养，将细胞分化成类似心肌前体细胞，最后再用维持培养基培养，得到心肌细胞；所述混合培养基为含有Chir99021和白术内酯Ⅱ的基础培养基，所述基础培养基为含B27添加剂、LAA2P的RPMI1640培养基；所述抑制剂培养基为含有Wnt-C59的基础培养基；所述维持培养基为基础培养基；所述步骤S1中，经过孵育培养后，还加入新鲜的干细胞培养基，吹打成细胞悬液，按1:4～1:8接种在96孔培养板中培养，放在生物安全柜中，盖上盖子，室温下静置1小时，使培养板完全、均匀地包被Matrigel，然后将细胞置于5％CO2的37℃恒温培养箱培养，关闭摇床盖子，控制摇摆速度≤200rmin，且包被过Matrigel的培养皿为采用1:150～250稀释的matrigel工作液完全覆盖培养皿，并于37℃静置过夜；所述步骤S2中，混合培养基中，Chir99021的浓度为4.6～5.8μmolL，白术内酯Ⅱ的浓度为5.3～6.3molL，所述基础培养基为含有2％的B27添加剂、64μgLLAA2P的RPMI1640培养基。

全文数据：

权利要求：

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