申请/专利权人：复旦大学

申请日：2023-03-08

公开（公告）日：2024-03-05

公开（公告）号：CN116103177B

主分类号：C12N1/19

分类号：C12N1/19;C12N15/12;C12N15/31;C12N15/81;C12P21/02;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.05#授权;2023.05.30#实质审查的生效;2023.05.12#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体为用马克斯克鲁维酵母制备可溶性铁蛋白纳米颗粒的方法。本发明首先提供高效重组表达铁蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是将密码子优化的人重链铁蛋白基因FTH1或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因FTNA或幽门螺旋杆菌铁蛋白基因截短体FtnA的表达载体转化马克斯克鲁维酵母所构建获得，分别记为：KM‑Fth1、KM‑Fth1‑14Δ、KM‑FtnA和KM‑FtnA‑3Δ；进一步将构建的马克斯克鲁维酵母工程菌株经发酵培养得到可溶性铁蛋白纳米颗粒。本发明提供的铁蛋白纳米颗粒的制造方法，在5L发酵罐中的产量达到11gL。

主权项：1.一种重组表达铁蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株，其特征在于，由如下步骤构建得到：（1）密码子优化人重链铁蛋白基因FTH1或幽门螺杆菌铁蛋白基因FTNA；（2）通过PCR扩增获得人重链铁蛋白基因FTH1或幽门螺杆菌铁蛋白基因FTNA的截短体基因，记为FTH1-14Δ和FTNA-3Δ；（3）分别将上述铁蛋白全长基因与截短体基因插入到马克斯克鲁维酵母表达载体pUKDN115，构建获得重组载体，记为：pUKDN115-Fth1、pUKDN115-Fth1-14Δ、pUKDN115-FtnA，和pUKDN115-FtnA-3Δ；（4）重组载体转化马克斯克鲁维酵母FIM-1URA3Δ菌株，获得的重组表达铁蛋白的马克斯克鲁维酵母菌株，记为：KM-Fth1、KM-Fth1-14Δ、KM-FtnA和KM-FtnA-3Δ；其中：所述人重链铁蛋白基因FTH1，其核苷酸序列为SEQIDNo.1所示，氨基酸序列为SEQIDNo.2所示；所述人重链铁蛋白截短体基因FTH1-14Δ，其核苷酸序列为SEQIDNo.3所示，氨基酸序列为SEQIDNo.4所示；所述幽门螺杆菌铁蛋白基因FTNA，其核苷酸序列为SEQIDNo.5所示，氨基酸序列为SEQIDNo.6所示；所述幽门螺杆菌铁蛋白截短体基因FTNA-3Δ，其核苷酸序列为SEQIDNo.7所示，氨基酸序列为SEQIDNo.8所示；所述马克斯克鲁维酵母FIM-1URA3Δ菌株是以保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCCNo.10621的马克斯克鲁维酵母FIM-1作为出发菌株，通过分子生物学技术方法，敲除尿嘧啶合成基因URA3作为筛选标记构建获得。

全文数据：

权利要求：

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