申请/专利权人：上海尚瑞生物医药科技有限公司;上海睿泰生物科技股份有限公司;复旦大学附属华山医院

申请日：2022-08-26

公开（公告）日：2024-03-08

公开（公告）号：CN117660294A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.08#公开

摘要：本发明涉及一种无血清的多能干细胞向角质形成细胞分化的方法，包括以下步骤：1配制分化细胞所需要的基质培养液DiffKcMedium；2培养多能干细胞；3多能干细胞分化角质形成细胞前体细胞。本发明根据现有无血清培养分化方法，提供了一种快速、高效率、无血清的角质形成细胞的分化方法。相比于目前存在的其他方法，本发明提供的方法耗时短、分化效率高，同时本方法不需要使用血清或其他动物来源的制剂，为将来在临床的应用提供了基础。通过细胞免疫荧光检测、细胞流式检测方法证实，本发明方法通过将人类胚胎干细胞分化为的角质形成细胞，分化出的角质形成细胞具有与人类正常原代角质形成细胞相似的细胞特性，并且在多次传代后细胞特性无显著的改变。

主权项：1.一种无血清的多能干细胞向角质形成细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1配制分化细胞所需要的基质培养液DiffKcMedium；2培养多能干细胞：利用GibcoEssential8TMMedium制备多能干细胞的悬液，并将多能干细胞滴入用BasementMembraneMatrix,LDEV-free包被的细胞培养板中培养；3多能干细胞分化角质形成细胞前体细胞：在培养的第0-8天加入DiffKcMedium，每2天换液一次；4继续分化角质形成细胞：在培养第8天，用0.01-1％的I型胶原溶液包被培养皿，将分化至第8天的细胞用GibcoTMCTSTMTrypLETMSelectEnzyme消化，使用DK-SFM将得到的细胞重新制备为细胞悬液，并将细胞种植到包被好的培养皿上，用DK-SFM培养细胞，隔天换液一次，直至细胞出现肉眼可见的角质形成细胞群。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海尚瑞生物医药科技有限公司;上海睿泰生物科技股份有限公司;复旦大学附属华山医院 一种无血清的多能干细胞向角质形成细胞分化的方法

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