申请/专利权人：中国人民解放军总医院第一医学中心;北京瑞升泰和科技有限公司

申请日：2023-11-08

公开（公告）日：2024-03-08

公开（公告）号：CN117660327A

主分类号：C12N5/078

分类号：C12N5/078;C12Q1/6883;C12Q1/6869

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.08#公开

摘要：本发明公开了一种胎儿有核红细胞的提取方法及其应用，该方法包括以下步骤：步骤一：获取单个胎儿有核红细胞；步骤二：针对单个胎儿有核红细胞进行单细胞全基因组扩增和STR分型，鉴定出细胞来源；步骤三：对鉴定为胎源的单细胞WGA产物进行分组，分为单细胞组和MIX组；步骤四：采用NGS靶点检测+基于NGS的单倍型分析+Sanger测序的组合测序方法对每个家系的多个样本进行检测。本发明通过设置混合WGA产物测序组，以及组合测序，克服了单细胞基因组扩增不均一、基因组覆盖率低、等位基因脱扣率高、数据量不足的问题，实现了基于单个胎儿有核红细胞进行胎儿单基因病无创产前检测的目的。

主权项：1.一种胎儿有核红细胞的提取方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：步骤一：获取单个胎儿有核红细胞：使用手动显微操作仪进行单细胞挑取，手动显微操作仪上固定有玻璃毛细管，将玻璃毛细管放置于液滴内，调节好玻璃毛细管内液柱位置，实现内外气压平衡；将玻璃毛细管尖端移动至目标细胞附近，吸取单个细胞，转移到含有1.5μLPBS溶液的PCR管中，再将细胞释放，当PBS液面下出现细微气泡或听到细微的吐气声时，表示细胞已经转移至PCR管内；将玻璃毛细管重新归位，在DAPI激发光下观察玻璃毛细管尖端是否有蓝色细胞核显影，来判断细胞是否转移成功；步骤二：针对单个胎儿有核红细胞进行单细胞全基因组扩增和STR分型，鉴定出细胞来源：单细胞全基因组扩增采用Takara公司的PicoPLEX单细胞全基因组扩增试剂盒v3；使用AmpFLSTRIdentifilerPlusKit对WGA产物进行STR基因分型，以鉴定候选细胞是胎儿来源还是母亲来源，将父系特异性STR位点≥2个做为判断其为胎源细胞的标准，确定为胎儿来源的有核红细胞才会进入到下一步测序和分析中；共检测16个STR位点：AMEL、D5S818、TH01、TPOX、FGA、D13S317、D18S51、CSF1PO、D16S539、D19S433、D21S11、D8S1179、D2S1338、D7S820、vWA和D3S1358；步骤三：对鉴定为胎源的单细胞WGA产物进行分组，分为单细胞组和MIX组；步骤四：采用NGS靶点检测+基于NGS的单倍型分析+Sanger测序的组合测序方法对每个家系的多个样本进行检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国人民解放军总医院第一医学中心;北京瑞升泰和科技有限公司 一种胎儿有核红细胞的提取方法及其应用

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