申请/专利权人：福建农林大学

申请日：2021-09-26

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN113848318B

主分类号：G01N33/558

分类号：G01N33/558;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2022.01.14#实质审查的生效;2021.12.28#公开

摘要：本发明涉及抗体工程与免疫检测领域，提供了一种青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金纳米花免疫侧流层析检测卡。本发明提供的青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金纳米花免疫侧流层析检测卡，检测时间10min，胶体金免疫侧流层析检测卡的检测阈值（消除T线）达到25μgmL，检测限（vLOD）达到0.1ngmL；纳米花免疫侧流层析检测卡的检测阈值（消除T线）达到25μgmL，检测限（vLOD）达到0.01ngmL。首次利用纳米花材料与抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体结合，制备胶体金纳米花免疫侧流层析检测卡，可实现对青环海蛇毒素SN311的高灵敏快速检测。

主权项：1.一种青环海蛇毒素SN311竞争法胶体金或金纳米花免疫侧流层析检测卡，其特征在于：所述检测卡包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳；所述的硝酸纤维素膜上设置有质控线和检测线，所述的质控线上喷有羊抗鼠的IgG抗体，所述的检测线上包被有青环海蛇毒素SN311抗原；所述的金标垫上含有胶体金或金纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体；所述金标垫中所含有胶体金或金纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆抗体，是由胶体金或金纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体溶液以每100mms和2μLcm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上干燥后得到的；所述胶体金的制备方法为：将1gHAuCl4溶于100mLddH2O中，得到1wt%的氯金酸水溶液，然后按1mL管平均分装于1.5mL无菌的EP管中，用锡箔纸密封后置于-20℃冰箱中保存备用；取1mL1wt%的氯金酸水溶液溶于100mLddH2O中，混匀后加热煮沸，随后加入2mL1wt%的柠檬酸三钠溶液，继续加热煮沸7min，观察氯金酸水溶液的颜色逐渐稳定成酒红色，将其放置室温冷却后，用无菌ddH2O定容至100mL，即得到胶体金溶液；所述金纳米花的制备方法为：取500μL直径18.4nm胶体金溶液加入100mLddH2O中，然后加入750μL1wt%的氯金酸水溶液混匀，再加入300μL1wt%的柠檬酸三钠摇匀，最后加入1mL0.03M的对苯二酚溶液，搅拌至溶液颜色变为蓝色即得到金纳米花溶液；所述抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体由保藏编号为CGMCCNo.21012的抗海蛇蛇毒SN311单克隆抗体杂交瘤细胞株8B1分泌获得；所述抗海蛇蛇毒SN311单克隆抗体杂交瘤细胞株8B1已于2020年11月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述胶体金标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体溶液的制备方法为：取10mL胶体金溶液置冰水浴搅拌，加入60μL0.1MK2CO3，后缓慢滴加240μL2.41mgmL的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体，维持冰水浴搅拌1h，按终浓度加入1wt%的BSA，维持冰水浴，搅拌30min，按终浓度0.5wt%加入PEG20000，继续搅拌30min，静置4℃平衡体系过夜，置4℃、1500rmin离心20min，弃沉淀，取上清置4℃、10000rmin离心5min，保留沉淀，按110体积重悬，重悬液配方按质量百分比计为：0.5%BSA+0.5%Glycine+5%Trehalose+0.5%Tween20溶于0.01MpH7.4PBS；所述金纳米花标记的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体溶液的制备方法为：取10mL金纳米花溶液置冰水浴搅拌，缓慢滴加240μL2.41mgmL的抗青环海蛇毒素SN311单克隆IgG抗体，维持冰水浴搅拌1h，按终浓度1wt%加入BSA，维持冰水浴，搅拌30min，按终浓度0.5wt%加入PEG20000，继续搅拌30min，静置4℃平衡体系过夜，置4℃、1500rmin离心20min，弃沉淀，取上清置4℃、10000rmin离心5min，保留沉淀，按110体积重悬，重悬液配方按质量百分比计为：0.5%BSA+0.5%Glycine+5%Trehalose+0.5%Tween20溶于0.01MpH7.4PBS；所述检测线上包被的青环海蛇毒素SN311抗原，是由0.67mgmL的青环海蛇毒素SN311蛋白以0.01MpH7.4的PBS按110进行稀释，在硝酸纤维膜上按照2μLcm进行划线干燥后得到的；所述质控线上包被的羊抗鼠IgG的抗体是由1mgmL的羊抗鼠IgG的抗体溶液以0.01MpH7.4的PBS按18进行稀释，在硝酸纤维膜上按照2μLcm进行划线干燥后得到的。

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权利要求：

百度查询： 福建农林大学 青环海蛇毒素竞争法胶体金/纳米花免疫层析检测卡

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