申请/专利权人：桂林电子科技大学

申请日：2020-04-26

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN111413384B

主分类号：G01N27/327

分类号：G01N27/327;G01N27/48

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2020.08.07#实质审查的生效;2020.07.14#公开

摘要：一种基于RGO‑CS‑HeminAuNPs纳米复合材料检测GPC3的方法，采用电沉积技术以及静电吸附作用将RGO‑CS‑HeminAuNPs修饰在丝网印刷电极表面，将GPC3aptamer负载在RGO‑CS‑HeminAuNPs材料表面，适配体因以单链结构的形式而呈不稳定的空间结构分布在生物传感界面上。在生物传感界面中加入GPC3后，GPC3能够与GPC3‑Apt特异性结合形成蛋白‑适配体复合物而呈稳定的空间结构，从而有序排列在工作电极表面，通过DPV法实现对GPC3的定量检测。该方法操作简单、省时、费用低且具有较低的检测限。

主权项：1.一种基于RGO-CS-HeminAuNPs纳米复合材料检测GPC3的方法，按以下步骤进行：步骤1：RGO-CS-Hemin材料的制备还原性氧化石墨烯RGO的制备：氧化石墨烯GO倒入蒸馏水中，溶解，制成GO水溶液；取制备好的GO水溶液，加入抗坏血酸使其还原GO，得RGO；还原性氧化石墨烯-血红素RGO-Hemin的制备：将Hemin用氨水溶解，用蒸馏水稀释，得到Hemin溶液；将RGO与Hemin混合，将8μL质量分数为80%的水合肼加入到RGO和Hemin混合液进行还原，水浴反应后，离心得RGO-Hemin复合物；还原性氧化石墨烯-壳聚糖-血红素RGO-CS-Hemin复合材料的制备：将壳聚糖用1%的乙酸溶液溶解，得到CS溶液；取CS溶液加入到RGO-Hemin复合物中，以浓度为10mmolL的EDCNHS活化，离心分离得RGO-CS-Hemin悬浊；步骤2：电极的修饰与生物传感界面的构建将丝网印刷电极置于0.5molLH2SO4溶液中，进行循环伏安扫描20段，电压范围为-0.4V-1.2V，得到活化后的丝网印刷电极，用水冲洗干净；将活化后的丝网印刷电极置入4mL0.01%的氯金酸，沉积电压为-0.5V，沉积时间120s；沉积结束后用水将电极冲洗干净，得到AuNPsSPE电极；将AuNPsSPE电极用戊二醛浸泡，用6μL0.5%的BSA溶液，吹干，而后滴加RGO-CS-Hemin悬浊液育，6μL0.5%的PBS洗涤，晾干，得到RGO-CS-HeminAuNPsSPE电极；取氨基化的GPC3适配体滴加到传感器界面，孵育，用PBS溶液洗涤未固定的GPC3适配体，滴加牛血清蛋白溶液进行封闭，得到GPC3aptamerRGO-CS-HeminAuNPsSPE传感界面，晾干备用；步骤3：GPC3的标准曲线绘制将标准GPC3溶液滴加到步骤2得到的GPC3aptamerRGO-CS-HeminAuNPsSPCE传感界面，孵育，温度为25°C，孵育时间为20分钟，用PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；将工作电极放入pH值为6.0的PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，扫描范围为0.2V-1.2V，扫描速率为0.01Vs，记录其峰电流；分别对不同浓度的GPC3进行检测，绘制标准曲线，计算出该方法的最低检测限；步骤4：实际血清样品中GPC3的检测在步骤2得到的GPC3aptamerRGO-CS-HeminAuNPsSPE传感界面，滴加待测实际血清样品；孵育，温度为25°C，孵育时间为20分钟，用pH值为6.0的PBS溶液清洗，得到工作电极，晾干备用；将工作电极放入PBS溶液中，采用电化学工作站的DPV扫描，扫描范围为0.2V-1.2V，扫描速率为0.01Vs；记录其峰电流；根据步骤3所述标准曲线，计算得到所述待测实际血清样品中GPC3的浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 桂林电子科技大学 一种基于RGO-CS-Hemin/Au NPs纳米复合材料检测GPC3的方法

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