申请/专利权人：杭州捷诺飞生物科技股份有限公司;清华大学

申请日：2019-06-24

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117717434A

主分类号：A61F2/04

分类号：A61F2/04;B33Y70/00;B33Y10/00;B33Y80/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本发明提供一种管状类组织结构体及其构建方法。所述方法包括：A、制备打印墨水；B、体外培养用于打印的细胞，得到细胞培养液；C、将打印墨水与细胞培养液分别连接生物打印机的不同喷头，共同打印到缠绕棒上，形成无缝的管状组织，然后去掉缠绕棒，即为中空的管状类组织结构体。该方法通过水平缠绕式细胞3D打印技术形成结构和细胞材料成分可控的管状结构。该管状类结构与人体脉管形状尺寸接近，并且具有适应人体所需求的力学与生物学性能，具备临床应用潜力，可用于药物检测、组织工程、再生医学、体外生理模型病理模型药理模型构建、组织器官人体芯片等方面。

主权项：1.管状类胆管结构体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1将0.02g牛血纤维蛋白原溶于500μl的DMEMF-12HEPES培养液中，得到纤维蛋白原溶液；2打印试剂1的制备：①hPSCs细胞培养：取适量的hPSCs细胞进行复苏培养，所用培养液为：activinA100ngml,bFGF80ngml,BMP-410ngml,LY29400210μM和CHIR990213μM，37℃过夜培养；②hPSCs向DE细胞的分化培养：次日，用添加有activinA100ngml,bFGF80ngml,BMP-410ngml和LY29400210μM的CDM–PVA培养液替换①的培养液，37℃过夜培养；第三天，用添加有activinA100ngml和bFGF80ngml的RPMIB27培养液，替换旧培养液；③DE细胞向FP细胞的分化：第4-6天，用添加有activinA50ngml的RPMIB27培养液替换旧培养液；第7-8天，用添加有activinA50ngml的RPMIB27培养液替换旧培养液；④FP细胞向HB细胞的分化：第9-12天，用含有SB-43154210μM和BMP-450ngml的RPMIB27培养液替换旧培养液；通过测定HNF4A、AFP和TBX3基因的表达与流式分析检测HB细胞的分化；⑤HB细胞向CP的分化：第13-16天，用含有FGF1050ngml,activinA50ngml和retinoicacid3μM的RPMIB27培养液替换旧培养液，通过测定Sox9基因的表达，检测CP细胞的分化；⑥用PBS冲洗CP细胞，添加细胞消化液，在37℃培养箱内孵育20分钟，用移液管收集细胞；将细胞转移至RPMIB27培养液中，重悬细胞，然后室温下，离心3分钟，弃上清，用含有EGF20ngml和Rho激酶抑制剂Y-2763210μm的50％Matrigel基质凝胶重悬细胞，计数后再次离心，弃上清，向细胞沉淀中加入步骤1的纤维蛋白原溶液，得到4×106cellsml的含细胞纤维蛋白原溶液，作为打印试剂1；3用DMEMF-12HEPES培养液配制20Uml的凝血酶母液；打印前，向0.12g无水氯化钙中加入500μl的凝血酶母液，溶解后放入37℃培养箱孵育5分钟，作为打印试剂2；4将打印试剂1和2分别连接生物打印机的不同喷头，共同打印到缠绕棒上，形成无缝的管状组织，然后去掉缠绕棒，得到中空的管状三维结构体；5将步骤4的管状三维结构体置于含EGF20ngml的WE培养液中，每2天更换培养基，培养2-4天后，形成管状类胆管结构体。

全文数据：

权利要求：

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