申请/专利权人：江苏大学

申请日：2022-04-01

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN114807203B

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/57;C12N9/52;A23L27/50;A23L29/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用；步骤为：将重组质粒pET28a‑hlyA转化原核宿主，诱导表达得嗜盐古菌蛋白酶，对其进行纯化和复性，孵育后得到高纯度的嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体HlyA△CTE，其氨基酸序列为HlyA的成熟酶序列缺少了CTE结构域SEQIDNo.1。HlyA△CTE具有优良的酶学特性，尤其是在高温、低盐、高盐、碱性等环境下均具有良好的稳定性；同时HlyA△CTE可用于催化蛋白类底物水解，包括对偶氮酪蛋白为代表的大分子蛋白质底物的催化作用，具体应用于鱼露发酵中促进对鱼蛋白的水解，为高盐、高温等环境中的蛋白降解提供新型酶制剂。

主权项：1.一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）首先基于重组质粒pET28a-hlyA，将其转化原核生物宿主，转化后的宿主细胞在添加诱导剂的LB培养基中进行诱导表达，随后在一定温度条件下离心收集菌体；（2）收集步骤（1）诱导表达后的菌体于细胞裂解液中进行重悬，超声破碎，离心收集上清液，使用镍柱亲和层析进行纯化，随后通过超滤置换复性得到成熟蛋白酶，记为HlyA；（3）将步骤（2）中得到成熟蛋白酶HlyA在水浴条件下进行孵育，即得到嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体，记为HlyA△CTE，其氨基酸序列为SEQIDNo.1。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用

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