申请/专利权人：天津大学;清华大学

申请日：2022-12-09

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN115820527B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12P7/42;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2023.04.07#实质审查的生效;2023.03.21#公开

摘要：本发明公开了一种生产甲羟戊酸的重组盐单胞菌及构建方法与应用，其构建方法为：1敲除盐单胞菌Halomonassp.TD01中基因phaB和基因phaC；2将基因mvaElac和基因mvaSlac表达单元靶向整合至步骤1所得菌株基因组G7位点；得到在G7位点整合有mvaElac和mvaSlac表达单元的重组菌株；3将基因mvaEef和mvaSef表达单元靶向整合至步骤2所得菌株基因组G4位点，得到生产甲羟戊酸的重组盐单胞菌；本发明构建的重组菌，有效利用不同碳源发酵生产甲羟戊酸，其甲羟戊酸产量和底物转化率高，稳定性好，无需诱导剂和抗生素。

主权项：1.一种生产甲羟戊酸的重组盐单胞菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：1）敲除盐单胞菌Halomonassp.TD01中3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶编码基因phaB和PHA合成酶编码基因phaC；所述TD01保藏登记号为CGMCCNo.4353；2）将乳杆菌来源的3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶编码基因mvaElac和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶编码基因mvaSlac表达单元靶向整合至步骤1）所得菌株基因组G7位点；得到在G7位点整合有mvaElac和mvaSlac表达单元的重组菌株Halomonassp.TDMVA-01；3）将粪肠球菌来源的3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶编码基因mvaEef和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶编码基因mvaSef表达单元靶向整合至步骤2）所得菌株基因组G4位点，得到生产甲羟戊酸的重组盐单胞菌；所述基因phaB的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述基因phaC的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述基因mvaElac和mvaSlac表达单元的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述基因组G7位点的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；所述基因mvaEef和mvaSef表达单元的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示；所述基因组G4位点的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津大学;清华大学 一种生产甲羟戊酸的重组盐单胞菌及构建方法与应用

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