申请/专利权人：江南大学

申请日：2021-09-15

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN113777295B

主分类号：G01N33/533

分类号：G01N33/533;G01N33/543;G01N33/574;G01N33/58;G01N33/68

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2021.12.28#实质审查的生效;2021.12.10#公开

摘要：本发明公开了一种检测细胞表面肿瘤标志物PD‑L1的量子点荧光探针、制备方法及应用，该探针荧光强度高，提高了相关检测的灵敏度。包括步骤：1识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的设计、识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的原核表达和纯化；2含有生物素基团多肽的制备；3识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白与生物素化多肽的体外酶法融合；生物素化的识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白的纯化；4生物素化的识别PD‑L1的纳米抗体重组蛋白与链霉亲和素标记量子点的偶联探针制备。本发明的探针荧光强度高，结合流式细胞术、免疫荧光、酶联免疫吸附技术能有效检测细胞表面肿瘤标志物PD‑L1的表达，方法简便，检测灵敏度高。

主权项：1.一种用于检测肿瘤标志物PD-L1的高灵敏度量子点探针，其特征在于，该探针由以下两个部分偶联形成：a、生物素化的识别PD-L1的纳米抗体重组蛋白RNB-MS-Bio，b、链霉亲和素标记的量子点；其中，所述生物素化的识别PD-L1的纳米抗体重组蛋白RNB-MS-Bio由以下组分偶联获得：c、识别PD-L1的纳米抗体重组蛋白RNB-MSH，d、生物素化多肽GK-Bio；其中，所述识别PD-L1的纳米抗体重组蛋白RNB-MSH的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示；所述生物素化多肽GK-Bio为含有生物素基团和甘氨酸重复的多肽序列，所述生物素化多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.4所示；所述识别PD-L1的纳米抗体重组蛋白RNB-MSH由识别PD-L1纳米抗体经羧基端修饰获得，所述识别PD-L1纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，所述羧基端修饰为：在所述识别PD-L1的纳米抗体的羧基端修饰Myc标签、转肽酶A识别位点、His标签序列，所述Myc标签为EQKLISEEDLNGAA，所述转肽酶A识别位点为LPETGG，其中，L：亮氨酸，P：脯氨酸，E：谷氨酸，T：苏氨酸，G：甘氨酸，所述His标签序列为HHHHHH，其中，H：组氨酸。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 用于检测肿瘤标志物PD-L1的高灵敏度量子点探针、制备方法及应用

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