申请/专利权人：西安天隆科技有限公司

申请日：2023-12-20

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117740747A

主分类号：G01N21/64

分类号：G01N21/64;G01N33/68

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了一种DNA单链结合蛋白活性的检测方法，通过设计单度链结合蛋白底物探针P，以及与探针P荧光量对等的标准曲线探针F1和标准曲线探针F2，利用不同梯浓度探针建立探针摩尔量与荧光增量的标准曲线，配置探针P反应体系，获得不同稀释浓度梯度的单链结合蛋白共10个循环对应的平均荧光增量y2，将荧光增量y2代入标准曲线，计算得到不同稀释倍数单链结合蛋白消耗的探针P量，建立1不同稀释倍数单链结合蛋白与消耗的探针P量之间的线性曲线，得到线性曲线方程，根据定义利用线性曲线方程计算得到蛋白活性。本发明的方法时间短，检测结果准确，便于使用与推广。

主权项：1.一种DNA单链结合蛋白活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、配制标准曲线探针F1和F2工作液，以不同梯度探针浓度为横坐标，以各浓度探针荧光稳定期的平均荧光增量y1为纵坐标，建立探针摩尔量与荧光增量的标准曲线；B、配置探针P反应体系，获得不同稀释浓度梯度的单链结合蛋白，获得不同稀释浓度梯度的单链结合蛋白在与步骤A中荧光稳定期相同的循环数内，各循环对应的平均荧光增量y2，将荧光增量y2代入建立的探针摩尔量与荧光增量标准曲线，计算得到不同稀释倍数单链结合蛋白消耗的探针P量，获得1不同稀释倍数单链结合蛋白与消耗的探针P量的“S”型曲线，其中，1不同稀释倍数单链结合蛋白表示为：不同稀释倍数单链结合蛋白的倒数；C、计算1不同稀释浓度梯度的单链结合蛋白下，核苷酸个数与单链结合蛋白个数的比例，得到相应散点图；D、选取步骤B中“S”型曲线的线性阶段，以及步骤C散点图中数据稳定的共同区域，建立1不同稀释倍数单链结合蛋白与消耗的探针P量之间的线性曲线，所述线性曲线的方程为y＝kx+b，方程中x为1单链结合蛋白稀释倍数，y为消耗的探针P量，k为斜率，b为常数；E、将y＝10代入步骤D中的线性曲线方程中，计算得到消耗10pmol探针P对应的单链结合蛋白稀释倍数，再利用公式：蛋白活性＝体系内对应原单链结合蛋白的浓度蛋白稀释倍数*体系内原单链结合蛋白的体积1000，计算得到蛋白活性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西安天隆科技有限公司 一种DNA单链结合蛋白活性的检测方法

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