申请/专利权人：阿思克立普药业有限公司

申请日：2023-07-25

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117736983A

主分类号：C12N5/078

分类号：C12N5/078

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了一种新型有核红细胞人造血液的培养方法，首先孕妇血液通过密度梯度离心法和重复免疫磁珠法获得有核红细胞，有核红细胞可以在适当条件下复制扩增，形成更多的有核红细胞，之后趋于平稳；从细胞形态学来看，细胞培养的前几天，细胞保持在有核红细胞的状态，随后有核红细胞脱核形成去核红细胞，经血红蛋白含量检测表明，红细胞脱核前后，血红蛋白质量和功能没有明显变化，意味着红细胞脱核前后有同样的输氧功能，直接将有核红细胞用于人工输血，保留红细胞核既可以保留红细胞在血液系统的复制增生功能，又可以在人造血红细胞培养过程中免除脱核冗长环节，加大造血速度和降低造血成本，解决人造血的困境。

主权项：1.一种新型有核红细胞人造血液的培养方法，其特征在于：具体包括如下步骤：步骤一：无菌操作下，用10支15mL真空EDTA-K2抗凝采血管均采孕妇外周血全血10X10mL，摇匀以避免溶血；步骤二：将步骤一的采血管轻轻装入离心杯，配平后，4℃，2000rmin离心10min，弃上清液，用10mL培养液将每个采血管中的细胞沉淀物分别转入离心管中，充分混匀后，4℃孵育10min，将8mL细胞分离液分别缓缓加入10个离心管底部，将上述血细胞培养液分别转入细胞分离液离心管中，室温1000rmin离心15min，收集红细胞层，用Hank's液5mL将每个采血管中的细胞沉淀物分别转入离心管中，离心操作后，洗涤细胞；分别加入5mLPBS液，轻轻混匀，室温下，500rmin离心10分钟，弃上清液，然后用10mL培养液混匀细胞，4℃孵育10min；步骤三：将CD71单抗包被的磁珠100μL分别加入步骤二的细胞离心管中，4℃孵育30min，孵育完成后，加入40mL缓冲液，离心弃上清，加入缓冲液5mL重悬红细胞；步骤四：将分离柱置于磁力架上，先用2mL缓冲液平衡柱子，然后加入细胞悬液，待分离柱中的细胞悬液微量时，再加入2mL缓冲液洗涤分离柱3次；步骤五：取下分离柱，放置到新的15mL离心管中，加入2mL缓冲液，然后将细胞吹下，然后用10mL培养液混匀细胞，4℃孵育10min；步骤六：将步骤5所得细胞经CD71单抗包被的磁珠100μL处理，重复纯化步骤3-5，收集的细胞经四重形态学标准鉴定为有核红细胞，得到种子细胞；步骤七：将种子细胞经悬浮培养体系体外培养扩增得到免脱核的有核人造血红细胞，即完成新型人造血液的制备。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 阿思克立普药业有限公司 一种新型有核红细胞人造血液的培养方法

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