申请/专利权人：江南大学

申请日：2023-03-24

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN116355940B

主分类号：C12N15/77

分类号：C12N15/77;C12N15/42;C12R1/15

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2023.07.18#实质审查的生效;2023.06.30#公开

摘要：本发明公开了一种猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达载体及其构建方法，构建得到的猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达载体在以谷氨酸棒状杆菌作为底盘菌株时能够分泌表达，与现有技术相比，实现了在除大肠杆菌以外的底盘菌株中表达VP1，提高其表达量以及活性；同时本发明还通过更换合成型启动子来构建表达载体，实现VP1表达量的进一步提升，为开发猪O型口蹄疫亚单位疫苗提供了一种新的更安全的方案。

主权项：1.一种猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达载体的构建方法，其特征在于：所述表达载体包括pXMJ19-VP1和pXMJ19-H36-VP1，序列分别如SEQIDNO.4和SEQIDNO.7所示；所述表达载体pXMJ19-VP1的构建方法包括，通过快切酶双酶切将序列如SEQIDNO.10所示的pXMJ19组成型空载质粒切开，获得质粒载体A；设计上下游引物p1、p2，引物序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，通过引物插入酶切位点，使用estaq聚合酶通过PCR对VP1模板进行反应，获得序列如SEQIDNO.3的VP1片段；通过连接酶连接VP1片段与质粒载体A，获得质粒pXMJ19-VP1，序列如SEQIDNO.4所示；将pXMJ19-VP1质粒转入大肠杆菌（Escherichiacoli）感受态中，培养、涂布、筛选并挑取单菌落继续培养后进行质粒提取，纯化后测序；所述VP1模板为VP1通过linker连接得到的4×VP1；其中，所述VP1的序列如SEQIDNO.8所示，所述linker的序列如SEQIDNO.9所示；所述表达载体pXMJ19-H36-VP1的构建方法包括，设计上下游引物p3、p4，引物序列分别如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示，通过引物将pXMJ19-VP1的启动子Ptac更换为H36启动子，使用PrimestarMAX聚合酶通过PCR对其进行反应，回收PCR反应后的产物进行重组，即得到序列如SEQIDNO.7所示的质粒pXMJ19-H36-VP1；将pXMJ19-H36-VP1质粒转入大肠杆菌感受态中，培养、涂布、筛选并挑取单菌落继续培养后进行质粒提取，纯化后测序；将所述表达载体转入谷氨酸棒状杆菌（C.glutamicum）感受态中，能够实现分泌表达。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 一种猪O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达载体及其构建方法和应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD