申请/专利权人：贵州省烟草公司贵阳市公司

申请日：2021-08-30

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN113789401B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2021.12.31#实质审查的生效;2021.12.14#公开

摘要：本发明公开了一种环介导等温扩增法检测烟草疫霉菌的引物及其检测方法，所述的引物由B3、F3、FIP和BIP四条特异性引物组成，其核苷酸序列分别为SEQIDNo.1‑4所示。所示检测方法包括以下步骤：（1）待测样品的病原菌分离纯化；（2）病原菌DNA提取；（3）LAMP等温扩增：选取脱氧核糖酸扩增试剂盒、荧光目视检测试剂、病原菌DNA和所述四条特异性引物进行环介导等温扩增反应；（4）结果判定：待反应结束后观察，如果产生肉眼可见的绿色荧光，则待测样品中含有烟草疫霉菌，否则不具有烟草疫霉菌。本发明可实现对烟草疫霉菌的快速高效检测，克服了统PCR检测的多个温度变换装置和凝胶成像系统的复杂工序与传统分子标记位点的针对性不强的弱点。

主权项：1.一种环介导等温扩增法检测烟草疫霉菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：1待测样品的病原菌分离纯化；2病原菌DNA提取；3LAMP等温扩增：选取脱氧核糖酸扩增试剂盒、荧光目视检测试剂、病原菌DNA和四条特异性引物进行环介导等温扩增反应；4结果判定：待反应结束后观察，如果产生肉眼可见的绿色荧光，则待测样品中含有烟草疫霉菌，如果不产生荧光，则待测样品中不具有烟草疫霉菌；其中，所述引物是根据烟草疫霉菌对烟草植株有明显作用的致病因子半胱氨酸蛋白酶基因PpCys45设计的，所述的引物由B3、F3、FIP和BIP四条特异性引物组成，其核苷酸序列分别为：B3：5’-GCGTTGGTAGGACTCTCCA-3’；F3：5’-GGAGCATGGCTTCCTTCC-3’；FIP：5’-TTCGACCAACAGCTTCGAGAGGACTCCGTCCTCGAAAAACAC-3’；BIP：5’-GATGCTCAAGCGGCGAACCCCAAACTCCTCGTGCGTCAG-3’。

全文数据：

权利要求：

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