申请/专利权人:东华大学
申请日:2022-03-01
公开(公告)日:2024-03-29
公开(公告)号:CN114703212B
主分类号:C12N15/70
分类号:C12N15/70;C12N15/10;C12N9/02;C12N1/21;C12R1/19
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2024.03.29#授权;2022.07.22#实质审查的生效;2022.07.05#公开
摘要:本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析,选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列,在对该序列DNA进行化学合成时,采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变,并将合成好的随机片段通过同源重组的方法,对野生酶的相同片段进行替换,构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库,通过二代测序对库容量进行检测,并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选,初筛到了5株酶活有所提升的漆酶,经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123,其表达蛋白序列如SEQIDNO:3所示。
主权项:1.一种漆酶,其特征在于,所述漆酶的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 东华大学 一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株LAC123
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