申请/专利权人：首都医科大学附属北京朝阳医院;中国科学院生物物理研究所

申请日：2023-12-29

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802090A

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12Q1/686

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种长片段基因的快速合成方法。所述方法包括以下步骤：分组设计并合成引物，每组包含2对4条引物；通过OverlapPCR法分组、分段组装前述合成的引物，多反应同时进行；对最终的PCR产物进行纯化与测序验证。本发明采用分组、分段的方式进行基因扩增，既避免了传统OverlapPCR扩增长片段成功率低的问题，又节省了合成时间，且不需要额外的试剂，具有成本低、易实现、易推广的优点，在基因合成技术领域具有良好的应用前景。

主权项：1.一种长片段基因的合成方法，包括如下步骤：1将目的长片段基因序列分成m个区段，然后分别针对每个区段设计OverlapPCR引物，得到m组引物；每组引物中包含2条正向引物和2条反向引物，2条正向引物分别记作引物F和引物F-T，2条反向引物分别记作引物R和引物R-T，其中，所述引物F-T为所述引物R-T的反向互补序列，两者均作为OverlapPCR扩增的模板，所述2条正向引物之间设有重叠区段，所述2条反向引物之间设有重叠区段，且相邻两组引物之间设有重叠区段；2分别将每组引物同时进行第1轮OverlapPCR扩增，得到m个OverlapPCR扩增产物；然后分别将相邻两组OverlapPCR扩增产物两两混合同时进行第2轮OverlapPCR扩增，使相邻两组OverlapPCR扩增产物中的小片段合成大片段；以此类推，通过多轮OverlapPCR扩增，得到最终OverlapPCR扩增产物，即为所述长片段基因。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 首都医科大学附属北京朝阳医院;中国科学院生物物理研究所 一种长片段基因的快速合成方法

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