申请/专利权人：阿特拉斯抗体有限公司

申请日：2018-02-09

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN110506124B

主分类号：C12Q1/6804

分类号：C12Q1/6804;C12N15/10

优先权：["20170209 SE 1750122-2"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2019.12.20#实质审查的生效;2019.11.26#公开

摘要：本发明涉及用于确定样品中的生物分子诸如蛋白质之间的相互作用水平的方法，其包括提供第一和第二携带信息IC的寡核苷酸，其中第一和第二IC寡核苷酸共价地或非共价地附接至具有与第一和第二生物分子结合的能力的第一和第二亲和试剂诸如抗体，其中第一和第二IC寡核苷酸各自包含与另一个寡核苷酸的一部分互补的至少一个单链链段，从而在第一和第二IC寡核苷酸中的至少一个中的至少一个单链链段与另一个寡核苷酸的其互补部分杂交后，能够在单细胞水平或单分子水平上测量样品中相互作用的第一和第二生物分子与非相互作用的第一和第二生物分子的相对比例。此外，本发明涉及包含实施本发明的方法必需的寡核苷酸和试剂的试剂盒。

主权项：1.用于确定样品中的生物分子之间的相互作用水平的方法，所述方法包括提供第一携带信息IC的寡核苷酸和第二携带信息IC的寡核苷酸，其中所述第一IC寡核苷酸和所述第二IC寡核苷酸共价地或非共价地附接至具有与第一生物分子和第二生物分子结合的能力的第一亲和试剂和第二亲和试剂，其中所述第一生物分子和所述第二生物分子是蛋白质或多肽，所述第一亲和试剂和所述第二亲和试剂为抗体或包含抗体的试剂，其中所述第一IC寡核苷酸和所述第二IC寡核苷酸各自包含与接收信息IR的寡核苷酸的一部分或活化寡核苷酸的一部分互补的至少一个单链链段，从而在所述第一IC寡核苷酸和所述第二IC寡核苷酸中的至少一个中的所述至少一个单链链段与另一个寡核苷酸的其互补部分杂交后，能够在单细胞水平或单分子水平上测量所述样品中相互作用的第一生物分子和第二生物分子与非相互作用的第一生物分子和第二生物分子的相对比例，并且其中所述第一IC寡核苷酸和所述第二IC寡核苷酸的所述单链链段能够促成：a所述第一IC寡核苷酸和或所述第二IC寡核苷酸和接收信息IR的寡核苷酸之间的相互作用，其中所述IR寡核苷酸携带至少两个裂解基序位点，所述裂解基序位点在与所述第一IC寡核苷酸和或所述第二IC寡核苷酸杂交之后变成双链以允许裂解，或者b所述第一IC寡核苷酸和或所述第二IC寡核苷酸和活化寡核苷酸之间的相互作用，其中与所述抗体连接的所述IC寡核苷酸被设计成含有发夹结构，并且其中所述IC寡核苷酸被修饰具有荧光团和淬灭剂，所述荧光团和淬灭剂被安置成使得每个寡核苷酸仅一个荧光团可以发射光，其中根据a的方法包括以下步骤：a.提供单链的接收信息IR的寡核苷酸，其中所述IR寡核苷酸分子是环状的或线性的；b.提供第一携带信息IC的寡核苷酸，所述第一携带信息IC的寡核苷酸包含与携带第一裂解基序的所述IR寡核苷酸的一部分互补的单链链段，其中所述第一IC寡核苷酸的出现反映所述样品中第一生物分子的量；c.提供第二携带信息IC的寡核苷酸，所述第二携带信息IC的寡核苷酸包含与携带第二裂解基序的所述IR寡核苷酸的一部分互补的单链链段，其中所述第二IC寡核苷酸的出现反映所述样品中第二生物分子的量；d.将步骤a-步骤c的IC寡核苷酸和IR寡核苷酸在允许互补的单链链段的结合的条件下混合；e.添加消化酶以在已经变成双链的所述裂解基序位点处创建切口，从而形成i.第一报告物标签结合位点，所述第一报告物标签结合位点将允许第一报告物标签DNA分子或序列的结合，所述第一报告物标签DNA分子或序列包含与所述第一IC寡核苷酸的一部分互补的单链链段，和或ii.第二报告物标签结合位点，所述第二报告物标签结合位点将允许第二报告物标签DNA分子或序列的结合，所述第二报告物标签DNA分子或序列包含与所述第二IC寡核苷酸的一部分互补的单链链段；f.通过以下替代方案中的任一种掺入报告物标签DNA序列：i.添加所述第一报告物标签DNA分子和所述第二报告物标签DNA分子，其中如果已经在所述第一裂解基序位点处创建切口，则所述第一报告物标签DNA分子在所述第一报告物标签结合位点处被掺入所述IR寡核苷酸中，和或如果已经在所述第二裂解基序位点处创建切口，则所述第二报告物标签DNA分子在所述第二报告物标签结合位点处被掺入所述IR寡核苷酸中；或ii.如果已经在所述第一裂解基序位点处创建切口，则使用DNA聚合酶和核苷酸通过填充与所述第一IC寡核苷酸上的所述第一报告物标签结合位点互补的空位来将所述第一报告物标签DNA序列掺入所述IR寡核苷酸中，和或如果已经在所述第二裂解基序位点处创建切口，则通过填充与所述第二IC寡核苷酸上的所述第二报告物标签结合位点互补的空位来将所述第二报告物标签DNA序列掺入所述IR寡核苷酸中；以及添加连接所述IR寡核苷酸的连接酶，从而提供重新创建的IR寡核苷酸；g.扩增步骤f的所述重新创建的IR寡核苷酸；h.监测所述第一报告物标签和或所述第二报告物标签在所述重新创建的IR寡核苷酸中的掺入，作为对所述样品中所述第一生物分子和或所述第二生物分子的出现和或所述第一生物分子和或所述第二生物分子之间的相互作用的量度。

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