申请/专利权人：云南农业大学

申请日：2023-09-22

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117247891B

主分类号：C12N5/04

分类号：C12N5/04;C12N15/82;A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2024.01.05#实质审查的生效;2023.12.19#公开

摘要：本发明涉及一种三七愈伤组织培养及其毛状根诱导方法，属于植物组培技术领域。该方法包括外植体的处理、愈伤组织诱导培养、菌液制备和共培养几大步骤。以ArA4载体的农杆菌作为毛状根诱导的菌株，以选择三七茎杆诱导产生且培养得到的绿色胚性愈伤组织为研究对象，通过遗传转化试验，经50‑60d时间的试验，诱导出的三七根状植物组织，PCR验证确定本试验诱导出的三七根状植物组织，即为以ArA4菌株通过遗传转化诱导出的三七毛状根。本发明所获得的结果为三七基因功能验证，即三七皂苷合成通路探究提供试验基础和理论依据。

主权项：1.三七愈伤组织培养及其毛状根诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），外植体的处理：选择生长状态好，无病虫害的新鲜一年生三七茎杆作为外植体，然后将外植体清洗干净并消毒灭菌，然后切成小段；步骤（2），愈伤组织诱导培养：将步骤（1）得到的外植体小段接种至愈伤组织诱导培养基中，于25℃条件下进行暗培养至愈伤长出，然后再光照培养至愈伤长至0.5cm-1cm大小，得到愈伤组织；所述的愈伤组织诱导培养基为FY4：12MS基础培养基+1mgLBA+0.1mgLIBA+15gL蔗糖+7.5gL琼脂+2mlL浓缩硅；步骤（3），菌液制备：取ArA4发根农杆菌甘油菌在含有100mgL卡那霉素的TY固体培养基表面划线并封口，在28℃条件下进行培养，将培养获得的单菌落接种至100mgL卡那霉素的TY液体培养基，封口后在28℃下摇床培养，培养至OD值为0.4-0.8；然后菌液在4℃离心后取出，无菌环境下倒掉上清液，加入重悬液，重悬至OD值为0.6-0.8，最后加入乙酰丁香酮至终浓度为100μmolL，混匀，得到重悬菌液；所述的含有100mgL卡那霉素的TY固体培养基为：5gL酵母浸粉+3gL蛋白胨+5gLNaCl+100mgL卡那霉素+8gL琼脂；所述的含有100mgL卡那霉素的TY液体培养基为：5gL酵母浸粉+3gL蛋白胨+5gLNaCl+100mgL卡那霉素；所述的重悬液为：MS基础培养基+10gLD-葡萄糖+20gL蔗糖，pH值为5.2；步骤（4），共培养：将步骤（2）得到的愈伤组织切成小块，切面朝上转接入共培养培养基中，并将步骤（3）制得的重悬菌液加入到切面上，于28℃黑暗条件下共培养，待毛状根长出后剪切毛状根再进行扩繁培养；所述的共培养培养基为：MS基础培养基+1mgLBA+0.1mgLIBA+15gL蔗糖+7.5gL琼脂，pH值为5.8。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 云南农业大学 三七愈伤组织培养及其毛状根诱导方法

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