申请/专利权人：成都云测医学生物技术有限公司

申请日：2024-01-04

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117551600B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/0775;A61K35/36;A61P17/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2024.03.01#实质审查的生效;2024.02.13#公开

摘要：本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种促进诱导间充质干细胞分化为真皮乳头细胞的培养基及诱导方法。使用无血清诱导培养基对间充质干细胞进行诱导培养，获得真皮乳头细胞；所述无血清诱导培养基是在DMEMF‑12基础培养基中添加活性成分形成，所述活性成分包括L‑丙氨酰‑L‑谷氨酰胺二肽、血清替代物、胰岛素‑转铁蛋白‑硒补充剂、肝细胞生长因子和氢化可的松。本技术方案的诱导方法以及培养基，可解决从干细胞诱导分化形成真皮乳头细胞的效率有限的技术问题，采用无血清诱导培养基及诱导方法，进一步提升细胞制剂或者疗法的安全性；采用诱导多能干细胞作为诱导起始细胞的来源，不会带来医学伦理学问题，具有理想的应用推广前景。

主权项：1.一种促进诱导间充质干细胞分化为真皮乳头细胞的诱导方法，其特征在于：使用无血清诱导培养基对间充质干细胞进行诱导培养，获得真皮乳头细胞；所述无血清诱导培养基是在含有0.542mgmL的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽的DMEMF-12基础培养基中添加活性成分形成，所述活性成分包括体积百分比为10%-20%的KnockOut血清替代物、体积百分比0.5%-5%的胰岛素-转铁蛋白-硒培养基补充剂、10ngmL-100ngmL的肝细胞生长因子和5ngmL-50ngmL的氢化可的松；所述间充质干细胞由诱导多能干细胞经诱导培养获得；诱导多能干细胞经过四个阶段的悬浮培养之后，形成脑类器官；脑类器官再经贴壁培养获得间充质干细胞；四个阶段的悬浮培养以及贴壁培养过程中使用的培养基为：第一阶段的培养基的组成为：GMEM基础培养基、NEAA1％-2％、Glumax1％-2％、β-巯基乙醇80-120nM、KnockOut血清替代物12-18％、Dorsomorphin0.8-1.5μM、A83-010.8-1.2μM和聚乙烯醇0.5-1.5％；第二阶段的培养基的组成为：GMEM基础培养基、NEAA1％-2％、Glumax1％-2％、β-巯基乙醇80-120nM、N21％-2％、SB-4315420.8-1.2μM、CHIR-990210.8-1.2μM、聚乙烯醇0.8-1.5％；第三阶段的培养基的组成为：MEM基础培养基、NEAA1％-2％、Glumax1％-2％、β-巯基乙醇80-120nM、N21％-2％、SB-4315420.8-1.2μM、CHIR990210.8-1.2μM、Martigel0.8-1.5％、聚乙烯醇0.8-1.5％；第四阶段的培养基的组成为：GMEM基础培养基、NEAA1％-2％、Glumax1％-2％、β-巯基乙醇80-120nM、N21％-2％、B272％-3％、胰岛素2μgmL；贴壁培养的培养基的组成为：GMEM基础培养基、NEAA1-2％、Glumax1％-2％、β-巯基乙醇100nM、N21％-2％、B272％-3％、b-FGF5-6ngml。

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