申请/专利权人：辽宁省海洋水产科学研究院

申请日：2020-08-19

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN112146949B

主分类号：G01N1/28

分类号：G01N1/28;G01N1/30;A61D7/00;A61D1/00;A61B16/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2021.01.15#实质审查的生效;2020.12.29#公开

摘要：一种刺参石灰环的完整提取方法，使用氯化镁或硫酸镁的海水溶液，松弛刺参，直至触手从刺参围口部完全伸展出来，固定在福尔马林溶液中，使用乙醇缓冲液交换福尔马林溶液，并于4℃冷藏静置脱水，使样品脱水率达到相对恒定50％～60％，用眼科剪、解剖刀、镊子工具对刺参进行解剖，首先切开腹部，排除体腔液，然后于体前15处切下口前端，再利用眼科剪和镊子从剥取石灰环；将所取石灰环浸入盛有次氯酸钠的培养皿中，闭合盖子在室温下消解残余结缔组织，消解完毕后，用蒸馏水吹洗石灰环，获得完整的刺参石灰环。采用该方法可以获得高度完整的刺参石灰环，从而满足研究刺参生活史不同阶段石灰环的形貌特征和生长发育规律的需要。

主权项：1.一种刺参石灰环的完整提取方法，其特征是：具体步骤如下：1刺参选取：适用于变态附着后的稚参、幼参及成参；2体重测量：用吸水纸吸干步骤1所选取的刺参体表水分，以分析天平测量湿重；3刺参麻醉：使用质量浓度为5％～10％氯化镁或质量浓度为5％～10％硫酸镁的海水溶液，松弛步骤2已知重量的刺参，直至触手从刺参围口部完全伸展出来；4刺参固定：将步骤3麻醉的刺参固定在质量浓度为5％-10％福尔马林溶液固定液中1h～12h，每升固定液中加入5g～10g碳酸钙作为缓冲液保护刺参骨骼；5刺参脱水：使用70％～75％的乙醇缓冲液交换步骤4固定液，所述70％～75％的乙醇缓冲液是每升质量浓度为70％～75％的乙醇溶液中加入5～10g碳酸钙配制而成，并于4℃冷藏静置脱水1-24h，43g以上的规格较大的刺参脱水24h后转入90％～95％的乙醇缓冲液继续4℃冷藏24h～96h，使样品脱水率达到相对恒定50％～60％，所述90％～95％的乙醇缓冲液是每升质量浓度为90％～95％的乙醇溶液中加入5g～10g碳酸钙配制而成；刺参脱水率＝Mo–MtMo，其中Mo为步骤2所测刺参重量，Mt为步骤5刺参转入乙醇缓冲液后脱水时间t时测定的刺参重量；6刺参解剖：用眼科剪、解剖刀、镊子工具对步骤5的刺参进行解剖，首先切开腹部，排除体腔液，然后于体前15处切下口前端，再利用眼科剪和镊子从剥取石灰环；7石灰环定量：将步骤6所取石灰环浸入盛有弱碱溶液的培养皿中，闭合盖子在室温下消解残余结缔组织15min～30min，消解完毕后用吸管将培养皿内弱碱溶液吸出，并用蒸馏水吹洗石灰环3次～5次，获得完整的刺参石灰环。

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权利要求：

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