申请/专利权人：南宁东恒华道生物科技有限责任公司

申请日：2024-02-26

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844786A

主分类号：C12N9/50

分类号：C12N9/50;A23L25/00;C12N11/02

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明提供一种坚果酥松专用酶的制备方法及其应用，首先对粗酶液进行盐析降低粗酶液中的杂质，再利用离子液体无机盐双水相萃取生物酶，采用侧链烷基较长的咪唑类醋酸盐和无机盐组成双水相体系，长链会增强离子液体的疏水性，从而提高无机相对粗酶的萃取率，使制备的生物酶酶活力高，酶活回收率高。最后将制备的生物酶进行固定化后与配料复配成酶制剂，经过固定化后的生物酶可以在低温和高温环境中有效发生酶促反应以改变坚果肉质，促进酥化后的口味，同时固定化的生物酶作用时间得到增长。

主权项：1.一种坚果酥松专用酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1在未成熟的新鲜木瓜上纵向均匀划若干个切口，收集乳汁，按乳汁：酶缓冲液＝1:1.5～2的比例加入酶缓冲液，10000rmin离心去杂10min，获得粗酶液；2在粗酶液加入饱和度为40～50％的硫酸铵，反应至沉淀不再产生后去除上清液，沉淀进行冷冻干燥后，得到粗酶物；3在22～25℃下，配置质量分数为20～36％的离子液体和质量分数为16～24％的无机盐液体，然后将无机盐溶液加入到离子液体中，混合均匀并将pH调为8～10，得到双水相萃取系统；所述的离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑醋酸盐、1-己基-3-甲基咪唑醋酸盐或1-辛基-3-甲基咪唑醋酸盐中的一种；所述的无机盐为磷酸氢二钾、硫酸镁或磷酸二氢钠中的一种；4将粗酶物溶于去离子水中制成5～8mgml的酶溶液，然后在双水相系统中按照体积比为8～9：1～2加入酶溶液，震荡混匀后以5000rmin的速度离心10min，静置至体系分相完成后，读取上下相的体积，测定上相和下相的蛋白浓度，最后通过紫外分光光度计扫描蛋白酶的最大吸收波长，通过标准曲线计算出上相中蛋白酶的萃取率，即可萃取得到生物酶。

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权利要求：

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