申请/专利权人：宁波大学

申请日：2023-10-18

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117849019A

主分类号：G01N21/65

分类号：G01N21/65;G01N33/574;G01N33/569;C23C14/34;C23C14/18;B22F9/24;B22F1/18;B22F1/054;B22F1/102;C01G3/02;B82Y40/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明公开了一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法及应用，特点是包括氧化铜纳米线‑银免疫基底的制备步骤；金纳米免疫探针的制备步骤；将含有前列腺癌症外泌体的待测溶液滴加到氧化铜纳米线‑银免疫基底上，然后将金纳米免疫探针溶液滴加到附着有外泌体的免疫基底上，通过抗原抗体特异性结合使得免疫探针与前列腺癌症外泌体相结合形成三明治免疫结构，即得到前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的步骤；优点是特异性强、灵敏度低，利于实现痕量前列腺癌外泌体的高灵敏检测。

主权项：1.一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1氧化铜纳米线-银免疫基底的制备将铜箔在空气中加热到500℃，保持1小时得到氧化铜纳米线后，采用小型离子溅射机在氧化铜纳米线上，于0.4帕，40瓦下溅射银1分钟，得到氧化铜纳米线-银，将氧化铜纳米线-银放置于10-100毫升浓度为10毫摩尔的二硫代双琥珀酰亚胺丙酸酯溶液中反应2小时再用乙醇清洗后，置于由10毫克每毫升的N-羟基丁二酰亚胺溶液和10毫克每毫升1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺溶液等体积混合的混合溶液中以活化羧基，将然后置于2-20微升浓度为10微克每毫升的CD63蛋白溶液静置反应1小时后，采用20-200微升浓度为1毫克每毫升的BSA溶液清洗后，即得到获得氧化铜纳米线-银免疫基底；2金纳米免疫探针的制备将40-400微升浓度为10毫克每毫升的柠檬酸钠和1-10毫升浓度为10毫克每毫升的氯金酸在120℃下反应1小时，得到金纳米颗粒后，加入10-100微升浓度为10毫摩尔每毫升的二硫代双琥珀酰亚胺丙酸酯和20-200微升浓度为1毫摩尔每毫升的罗丹明B，离心收集沉淀，用乙醇清洗后重溶到PBS溶液中，然后置于由10毫克每毫升的N-羟基丁二酰亚胺溶液和10毫克每毫升1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺溶液等体积混合的混合溶液中以活化羧基后，加入2-20微克EpCAM抗体溶液，静置反应1小时后，加入20-200微升浓度为1毫克每毫升的BSA溶液，离心清洗后得到金纳米免疫探针；3基于三明治结构的免疫检测体系制备将20-200微升含有前列腺癌症外泌体的待测溶液滴加到氧化铜纳米线-银免疫基底上，在37℃下反应2小时，通过抗原抗体特异性结合使得免疫基底捕获前列腺癌症外泌体后，将10-100微升浓度为10毫克每毫升的金纳米免疫探针溶液滴加到附着有外泌体的免疫基底上，在37℃下反应2小时，通过抗原抗体特异性结合使得免疫探针与前列腺癌症外泌体相结合形成三明治免疫结构，即得到前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 宁波大学 一种前列腺癌外泌体的表面增强拉曼散射免疫检测体系的制备方法及应用

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