申请/专利权人：合肥工业大学

申请日：2023-12-30

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117821504A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/29;A01H6/82;A01H5/08

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开

摘要：一种通过SLERF7基因编辑介导蔗糖代谢改善番茄采后品质的方法，首先构建pBI121过表达载体，利用根癌农杆菌感受态EHA105转化番茄品种“Micro‑Tom”，获得T0代OE植株。提取T0代OE番茄植株叶片总RNA，将RNA反转录为cDNA，并以此为模板进行qRT‑PCR，测定SlERF7基因表达量。收取T0代鉴定成功的OE番茄植株种子种植得到T1代。对获得的T1代OE番茄植株进行鉴定，然后收取T1代OE植株番茄种子种植得到T2代，采摘T2代处于绿熟期的OE番茄植株果实进行后续实验。本发明为进一步阐明UV‑C辐照在番茄果实采后蔗糖代谢中的调控机制提供了宝贵信息，在番茄中的探索不仅将推进和完善我们对SlERF7在糖积累中的功能的认识，对分子在番茄果实糖组成遗传调控和品质改良方面的研究进展具有重要意义。

主权项：1.一种通过SLERF7基因编辑介导蔗糖代谢改善番茄采后品质的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将储存的EHA105感受态细胞部分融化成冰水混合物后插入冰中；吸取5μL重组质粒DNA缓慢加入到50μLEHA105感受态细胞中；然后依次按照冰浴5min，液氮5min，37℃水浴5min，最后冰浴5min的顺序操作；随后加入700μL无抗生素的灭菌LB液体培养基，在28℃摇床以转速200rmin振荡1-2h培养，6000rpm离心5min，弃掉多余上清留取80-120μL上清液重悬菌体涂板；在恒温恒湿培养箱28℃里培养2-3d后，在无菌超净工作台中挑取单克隆至200μLLB液体培养基中培养12-16h；然后吸取2μL培养好的菌液进行菌落PCR鉴定；然后吸取5µL菌液跑胶检测产物条带位置是否符合理论结果；将鉴定成功的菌液取出10μL至3mL含有抗生素LB的液体培养基中进行扩大培养，得到农杆菌重悬液；步骤2：将番茄种子依次在35℃左右的温水中浸泡约30min，质量分数为5%的NaClO中浸泡10min，然后将种子用无菌水冲洗3-4次，点播于装有MS培养基的三角烧瓶中；先置于4°C冰箱中2-3d，再进行暗培养7d，出苗后转移到25°C光照下培养；在第一片真叶长出之前剪下8-10天龄的子叶；如果子叶长于1cm，则将其切成两半，面朝下放在预培养基上；步骤3：将愈伤组织的筛选和生根将步骤2的子叶在步骤1获得的农杆菌重悬液中浸泡15min，然后取出用无菌滤纸上吸掉外植体表面液体后置于Co培养基中密封，在25℃下培养3d，光照16h，得到外植体；将外植体从Co培养基中转移到2Z筛选培养基中，每天在25℃下培养16h；3周后更换培养基，继代培养，直到愈伤组织长出新芽并分化成长茎；当植株长到2-3cm时，切除外植体底部周围多余的愈伤组织，转移到生根培养基中，并每天在25℃光照16h让其生根；在幼苗的根系发育完成后，将其转移到花盆中，在25℃的温室中光照培养16h，从而得到T0代Crispr植株；提取T0代番茄植株叶片基因组DNA，以此为模板进行PCR然后测序鉴定；收取T0代鉴定成功的Crispr番茄植株种子种植得到T1代；对获得的T1代Crispr植株进行鉴定，然后收取T1代鉴定成功的Crispr番茄植株种子种植得到T2代，采摘T2代处于绿熟期的Crispr番茄植株果实进行后续实验；步骤4：首先构建pBI121过表达载体，利用根癌农杆菌感受态EHA105转化番茄品种“Micro-Tom”，获得T0代OE植株，具体方法与步骤1相同；提取T0代OE番茄植株叶片总RNA，将RNA反转录为cDNA，并以此为模板进行qRT-PCR，测定SlERF7基因表达量；收取T0代鉴定成功的OE番茄植株种子种植得到T1代；对获得的T1代OE番茄植株进行鉴定，然后收取T1代OE植株番茄种子种植得到T2代，采摘T2代处于绿熟期的OE番茄植株果实进行后续实验。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合肥工业大学 一种通过SLERF7基因编辑介导蔗糖代谢改善番茄采后品质的方法

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