申请/专利权人：山东省分析测试中心

申请日：2023-11-20

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117821618A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6806;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.05#公开

摘要：本发明公开了一种鉴定连作模式丹参利用光合碳根际细菌的方法，属于中药材栽培技术领域，包括以下步骤：S1、13C‑CO2脉冲标记，实验前先使用13C‑CO2来冲洗标记箱并去除12C‑CO2，13C‑CO2脉冲标记30天结束后，将连作丹参植株继续培养10天以利于光合产物的转移与分配，同时设置12C‑CO2丹参作为对照组实验。利用13C‑CO2对连作丹参植株进行光合脉冲标记，持续标记30天后，提取根际土壤中的微生物总DNA，经CsCl密度梯度超高速离心技术分离13C‑DNA，并应用高通量基因组测序技术以鉴定代谢植物源碳的根际细菌类别的方法，具有高效稳定、可重复等特点，筛选出了利用光合碳根际细菌的种类。

主权项：1.一种鉴定连作模式丹参利用光合碳根际细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、13C-CO2脉冲标记，实验前先使用13C-CO2来冲洗标记箱并去除12C-CO2，13C-CO2脉冲标记30天结束后，将连作丹参植株继续培养10天以利于光合产物的转移与分配，同时设置12C-CO2丹参作为对照组实验；S2、根际土壤收集及DNA提取，消毒过的刷子仔细收集根部表面约1毫米以内的土壤，过2mm的筛并将根际土壤存储在-80℃备用，利用提取试剂盒提取根际土壤0.5gDNA；S3、CsCl密度梯度超高速离心样品的制备，将约3.0μgDNA与CsCl溶液充分混合，离心结束后使用注射器泵从超离心管顶部用无菌水置换梯度培养基，获得不同密度层DNA样品，将分离得到的DNA纯化溶于TE缓冲液中用于高通量测序；S4、高通量测序鉴定利用光合碳根际细菌类别，将符合密度要求的非连作及连作丹参根际土壤DNA样品采用细菌16SrRNA的V3-V4作为其多样性鉴定对应区域进行PCR扩增高通量测序。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东省分析测试中心 一种鉴定连作模式丹参利用光合碳根际细菌的方法

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