申请/专利权人：江西农业大学

申请日：2024-02-23

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117821498A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;A01H5/06;A01H6/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种发根农杆菌介导的猪屎豆毛状根诱导方法，该包括猪屎豆无菌苗的培育、猪屎豆外植体的预培养、发根农杆菌与猪屎豆植株共培养、猪屎豆的除菌培养、猪屎豆毛状根优质株系的筛选。本发明通过发根农杆菌介导，首次建立起了发根农杆菌介导的猪屎豆毛状根诱导和培养体系，解决了猪屎豆次生代谢产物含量低、不稳定的难题，为提高猪屎豆次生代谢产物产量提供了新方法，进而为实现工业化大规模量产提供了新思路。

主权项：1.一种发根农杆菌介导的猪屎豆毛状根诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.猪屎豆无菌苗的培育：在无菌条件下，将猪屎豆种子进行消毒处理，消毒后的种子接种至萌发培养基上进行培养，得到无菌苗；S2.猪屎豆外植体的预培养：从得到的长势较好的无菌苗中剪取嫩茎或叶片作为外植体，在外植体表面制造创口后，将外植体接种至预培养培养基表面暗培养2-3d；S3.发根农杆菌与猪屎豆植株共培养：将预培养的外植体浸入到发根农杆菌重悬液中，在25℃、100rmin条件下振荡浸染10-20min，然后用无菌滤纸吸干外植体表面水分后转接到含有乙酰丁香酮的共培养培养基上，在25℃条件下暗培养2-3d；S4.猪屎豆的除菌培养：将经共培养获得的外植体转接到含有头孢噻肟的除菌培养基上进行除菌培养，得到毛状根；S5.猪屎豆毛状根优质株系的筛选：提取步骤S4得到的毛状根的基因组DNA进行PCR扩增，产物进行阳性鉴定，挑选除菌彻底、PCR产物阳性、生长状态良好的猪屎豆毛状根转移至空白的12MS培养基继续暗培养，得到生长旺盛的毛状根。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江西农业大学 一种发根农杆菌介导的猪屎豆毛状根诱导方法

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