申请/专利权人：山东师范大学

申请日：2021-12-20

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN114480613B

主分类号：C12Q1/6883

分类号：C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6844;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明涉及一种MazF介导的FTO酶的检测方法及抑制剂筛选方法。RNA去甲基化酶RNA去甲基酶的异常表达与各种人类疾病有关，可作为新的生物标志物和潜在治疗靶点。因此，灵敏的检测RNA去甲基酶并筛选其抑制剂对生物医学研究和临床诊断至关重要。本发明提供了一种利用MazF介导的引物诱导的滚环扩增的无标记方法灵敏检测FTO活性。该方法操作简单，灵敏度高，特异性好，可在单细胞水平检测FTO活性。此外，该方法可用于动力学参数的测定和FTO抑制剂的筛选，有望应用于抗肿瘤活性化合物的开发。

主权项：1.一种检测试剂的组合，其特征在于，所述检测试剂的组合中，包括RNA探针，MazFmRNA切割酶，T4PNK酶及环形模板；所述RNA探针中具有m6ACA序列，所述环形模板中具有引物结合位点，其扩增链上具有至少一个内切酶识别位点；所述RNA探针被检测环境中的FTO酶识别并消除RNA探针中的甲基化，去甲基化的探针被MazF酶识别并且切成为两条短链，A链和B链，所述B链的3’端保留原RNA探针3’的氨基修饰，所述A链的3’端暴露出2′，3′-环磷酸基团，在T4PNK酶的催化作用下形成3′-羟基末端从而成为环形模板的引物链，所述引物链与环形模板中的识别位点结合引发扩增，扩增形成的扩增链携带内切酶的识别位点从而被剪切成使荧光染料发光的单链DNA；所述RNA探针的序列如下： GCAAUCGUAUCUUCUCG mACAUUUAAAAAA-NH2；所述环形模板的序列如下：TGACCCACCCACCCACCCACAGAATGCTGACCCACCCACCCACCCACAGAATGCTGTCGAGAAGATACGATTGC；所述检测试剂的组合中还具有荧光DNA结合染料，所述荧光DNA结合染料为SYBRgold。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东师范大学 一种MazF介导的FTO酶的检测方法及抑制剂筛选方法

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