申请/专利权人：上海大学

申请日：2024-01-12

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117867004A

主分类号：C12N15/81

分类号：C12N15/81;C12N15/52;C12N15/29;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/61;C12N15/31;C12N1/19;C12P19/44;C12R1/865

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明涉及合成植物木脂素苷的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用。本发明首次实现利用酿酒酵母合成了复杂苯丙素类化合物抗病毒活性木脂素苷，克服了以阿魏酸为底物合成木脂素苷直铁线莲宁B、松脂素单糖苷和松脂素双糖苷的关键技术难点，通过导入外源途径，匹配最优酶组合提高催化效率，增加拷贝数，增强前体供应，为苯丙素类化合物木脂素苷的生物合成提供参考。本发明利用微生物合成木脂素苷直铁线莲宁B、松脂素单糖苷和松脂素双糖苷，能高效、稳定生产抗病毒活性木脂素苷，为后续木脂素苷的大规模生物合成提供了强有力的研究和应用基础。

主权项：1.一种合成植物木脂素苷的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，所述合成植物木脂素苷的酿酒酵母工程菌能够生产木脂素苷直铁线莲宁B、松脂素单糖苷和松脂素双糖苷；以酿酒酵母为出发菌株进行基因改造，获得所合成植物木脂素苷的酿酒酵母工程菌，所述基因改造方式选自以下方式中的任意一种：1整合CoAl模块；2整合CoAl模块和Pin模块；3整合CoAl模块、Pin模块和Lar模块；4整合CoAl模块、Pin模块和UGT模块；5整合CoAl模块、Pin模块、Lar模块和UGT模块；其中，CoAl模块中导入的外源基因选自以下中的一种或几种的组合：酿酒酵母密码子优化过的毛果杨Populustrichocarpa4-香豆酸辅酶A连接酶4Cl的编码基因Ptr4CL3、Ptr4CL5，酿酒酵母密码子优化过的菘蓝Isatisindigotica4-香豆酸辅酶A连接酶4Cl的编码基因Ii4CL3，酿酒酵母密码子优化过的拟南芥Arabidopsisthaliana肉桂酰辅酶A还原酶Ccr的编码基因AtCCR1，酿酒酵母密码子优化过的毛果杨P.trichocarpa肉桂酰辅酶A还原酶Ccr的编码基因PtrCCR2，以及酵母内源醇脱氢酶Adh6的编码基因ScADH6；Pin模块中导入的外源基因选自以下中的一种或几种的组合：酿酒酵母密码子优化过的谷氨酸棒状杆菌Corynebacteriumglutamicum漆酶的编码基因CgL1，酿酒酵母密码子优化过的栓菌Trametessp.C30漆酶Lac的编码基因TsLAC3，酿酒酵母密码子优化过的云芝Trametesversicolor漆酶Lac的编码基因TvLAC1和菘蓝I.indigotica指导蛋白Dir的编码基因IiDIR1、IiDIR2；Lar模块中导入的外源基因选自以下中的一种或几种的组合：酿酒酵母密码子优化过的拟南芥A.thaliana松脂素还原酶Prr的编码基因AtPRR，酿酒酵母密码子优化过的菘蓝I.indigotica松脂素还原酶Plr的编码基因IiPLR1，酿酒酵母密码子优化过的桃儿七Sinopodophyllumhexandrum松脂素还原酶Plr的编码基因ShPLR；UGT模块中导入的外源基因选自以下中的一种或几种的组合：菘蓝I.indigotica糖基转移酶Ugt的编码基因IiUGT71B2、IiUGT71B5a、IiUGT71B5b，以及酵母内源磷酸葡萄糖糖化酶Pgm1的编码基因ScPGM1和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶Ugp1的编码基因ScUGP1；其中，酿酒酵母密码子优化过的Ptr4CL3核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，酿酒酵母密码子优化过的Ptr4CL5核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，酿酒酵母密码子优化过的Ii4CL3核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，酿酒酵母密码子优化过的AtCCR1核苷酸序列如SEQIDNO.4所示，酿酒酵母密码子优化过的PtrCCR2核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，ScADH6的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，酿酒酵母密码子优化过的CgL1核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，酿酒酵母密码子优化过的trTsLAC3核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，酿酒酵母密码子优化过的TvLAC1核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，trIiDIR1的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，trIiDIR2的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，酿酒酵母密码子优化过的AtPRR核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，酿酒酵母密码子优化过的IiPLR1核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，酿酒酵母密码子优化过的ShPLR核苷酸序列如SEQIDNO.14所示，IiUGT71B2的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，IiUGT71B5a的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示，IiUGT71B5b的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示，ScPGM1的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示，ScUGP1的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示。

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权利要求：

百度查询： 上海大学 合成植物木脂素苷的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用

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