申请/专利权人：天津科技大学

申请日：2023-12-28

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866998A

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/46

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种载体、生产低分子量透明质酸菌株及其构建方法与应用，通过构建六磷酸葡萄糖异构酶hasE敲除载体，并将该载体转入兽疫链球菌ATCC39920中得到hasE基因敲除菌株。随后构建六磷酸果糖激酶基因scrK的过表达载体，并将该载体转入兽疫链球菌ATCC39920的hasE敲除菌株中，获得scrK过表达菌株。本发明基因工程菌株应用于低分子量透明质酸的生产，通过发酵法可以获得稳定的小分子量透明质酸。该基因工程菌株具有很好的工业化应用前景。通过发酵能够得到分子量为1.43MDa的HA，与野生型兽疫链球菌相比，透明质酸分子量降低了42％左右。

主权项：1.一种含有hasE基因左臂右臂的载体，其特征在于：所述载体将氯霉素启动子Pcm与sacB基因分别扩增后进行重叠PCR获得共1238bp基因片段Pcm-sacB；将hasE基因的左臂hasE-L与hasE基因右臂hasE-R分别扩增后进行重叠PCR获得共1310bp基因片段hasE-LR；将重叠片段Pcm-sacB以及hasE-LR插入初始载体pSET4s中，构建了敲除载体pSET4S::sacB::hasE-LR，即得；其中，所述Pcm来源于pSET1，其核苷酸序列如序列SEQIDNO.1所示，sacB来源于pK18mobsacB,其核苷酸序列如序列SEQIDNO.2所示；所述Pcm-sacB是Pcm和sacB基因通过重叠PCR连接到一起得到的；所述hasE-L来源于兽疫链球菌，菌株保藏编号为ATCC39920，其核苷酸序列如序列SEQIDNO.3所示；hasE-R来源于兽疫链球菌，菌株保藏编号为ATCC39920,其核苷酸序列如序列SEQIDNO.4所示；所述hasE-LR是hasE-L、hasE-R连接在一起的序列，是以hasE-L、hasE-R为模板通过重叠PCR技术扩增得到的。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津科技大学 一种载体、生产低分子量透明质酸菌株及其构建方法与应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD