申请/专利权人：元码基因科技(北京)股份有限公司

申请日：2023-11-13

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117230171B

主分类号：C12Q1/6876

分类号：C12Q1/6876;C12Q1/6806;C40B50/06;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2024.01.02#实质审查的生效;2023.12.15#公开

摘要：本发明公开端粒扩增子测序用试剂盒及预文库构建方法。本发明设计了一种端粒特异性接头，其包括引物结合区和含有封闭基团的端粒特异性结合区，该端粒特异性结合区能够与端粒3’端悬臂的至少部分特异性结合。本发明的端粒特异性接头可识别完整端粒末端，并避免非完整末端被建库。此外，本发明在端粒序列附近的基因组序列上还设计了针对端粒扩增使用的端粒特异性PCR引物，在连接接头后不需要进行酶切处理，同时也不需要再在片段两端添加通用接头，进一步简化了实验流程。

主权项：1.一种基于定点成环连接的端粒扩增子预文库构建试剂或试剂盒，其特征在于，包含端粒特异性接头和端粒特异性PCR引物，所述端粒特异性PCR引物包括SEQIDNo.1-12所示序列中的至少一种外侧引物和SEQIDNo.13-24所示序列中的至少一种内侧引物序列，所述端粒特异性接头包括引物结合区和含有封闭基团的端粒特异性结合区，所述端粒特异性结合区包含能够与端粒3’端悬臂的至少部分特异性结合的序列，所述端粒特异性接头序列的5’端具有磷酸化修饰，该5’端在环化酶的作用下与端粒的3’悬臂的末端形成环结构，所述引物结合区含有巢式引物结合位点，所述端粒特异性结合区具有高于55℃的Tm值，所述引物结合区对应的引物序列的Tm值在55℃-70℃之间，所述端粒特异性接头的3’端含有封闭基团，所述端粒特异性接头进一步包含非标准DNA或RNA类似物，其选自iXNA_A、iXNA_T、iXNA_G和iXNA_C中的至少一种，其中iXNA_A是指对碱基A进行修饰；iXNA_T是指对碱基T进行修饰；iXNA_G是指对碱基G进行修饰；iXNA_C是指对碱基C进行修饰，所述端粒特异性接头序列为AGGATGACAGAATGCCATATGCAAGTCATATGGACCAGTCAATTAACCCTAACCiXNA_CiXNA_TiXNA_A，或AGGATGACAGAATGCCATATGCAAGTCATATGGACCAGTCAATAAiXNA_CCTiXNA_AACCiXNA_CTAiXNA_AC。

全文数据：

权利要求：

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