申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2023-06-20

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN116941527B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2023.11.14#实质审查的生效;2023.10.27#公开

摘要：一种牛皮杜鹃高效不定芽诱导及植株再生方法，它属于植物组织培养领域，本发明是基于黑龙江省五常市凤凰山国家自然保护区的野生牛皮杜鹃材料，考虑到其基因型、生长环境等与现有技术中材料的不同，导致现有技术并不适用于本发明野生牛皮杜鹃材料，再生植株获得困难的问题。本发明以黑龙江省五常市凤凰山国家自然保护区的牛皮杜鹃野生植株水培嫩叶做外植体，进行牛皮杜鹃不定芽诱导及植株再生。本发明通过组织培养进行组培快繁，繁殖效率高，安全、简单易操作，适合工厂化生产，不受季节限制，组培苗长势一致，能够保持其母本的优良品质。

主权项：1.一种牛皮杜鹃高效不定芽诱导及植株再生方法，其特征在于所述的方法是按照以下步骤进行的：一、外植体的采集及处理：选择生长健壮、无病虫害的野生牛皮杜鹃植株，剪取带顶芽的8～12cm的枝条，进行水培处理，待嫩叶展开时剪下，用自来水冲洗0.5～1h，在无菌操作台内进行消毒处理；二、不定芽分化诱导及增殖：将步骤一消毒处理后的材料接种到不定芽诱导培养基WPM-AI中培养，培养条件为：温度25±2℃，每日光照12～16h，光照强度30～40μmol·m-2·s-1；培养15～40d诱导不定芽；然后更换新鲜WPM-AI培养基，继续培养30d进行不定芽的继代增殖；三、不定芽伸长诱导：将带有不定芽的愈伤组织分块放入不定芽伸长培养基WPM-SE中，在温度为25±2℃，每日光照12～16h，光照强度30～40μmol·m-2·s-1的条件下培养10～30d促使不定芽伸长；四、不定芽生根培养：将茎长1～2cm的单个芽剪下，接种于生根培养基WPM-R中，在温度为25±2℃，每日光照12～16h，光照强度30～40μmol·m-2·s-1的条件下培养30～60d进行生根培养；五、炼苗和移栽：将根长超过2cm的植株经炼苗2～3d后移栽到基质中进行温室育苗；步骤二中所述不定芽诱导培养基WPM-AI由70～80mgLCaCl2、160～180mgLKH2PO4、950～1000mgLK2SO4、180～190mgLMgSO4、300～500mgLNH4NO3、0.2～0.3mgLCuSO4·5H2O、36～37mgLFeNaEDTA、6～7mgLH3BO3、22～23mgLMnSO4·H2O、0.2～0.3mgLNa2MoO4·2H2O、8～9mgLZnSO4·7H2O、470～475mgLCaNO32·4H2O、1～3mgL甘氨酸、80～120mgL肌醇、0.4～0.6mgL烟酸、0.4～0.6mgL盐酸吡哆醇、0.8～1.2mgL盐酸硫胺素、20～30gL蔗糖、5～6gL琼脂、0.1mgL吲哚-3-丁酸、0.5mgL噻苯隆和蒸馏水制成，pH值为5.6；步骤三中不定芽伸长培养基WPM-SE由70～80mgLCaCl2、160～180mgLKH2PO4、950～1000mgLK2SO4、180～190mgLMgSO4、300～500mgLNH4NO3、0.2～0.3mgLCuSO4·5H2O、36～37mgLFeNaEDTA、6～7mgLH3BO3、22～23mgLMnSO4·H2O、0.2～0.3mgLNa2MoO4·2H2O、8～9mgLZnSO4·7H2O、470～475mgLCaNO32·4H2O、1～3mgL甘氨酸、80～120mgL肌醇、0.4～0.6mgL烟酸、0.4～0.6mgL盐酸吡哆醇、0.8～1.2mgL盐酸硫胺素、20～30gL蔗糖、5～6gL琼脂、0.01～1.0mgL吲哚-3-丁酸、0.0001～0.1mgL噻苯隆和蒸馏水制成，pH值为5.6；步骤四中的生根培养基WPM-R由70～80mgLCaCl2、160～180mgLKH2PO4、950～1000mgLK2SO4、180～190mgLMgSO4、300～500mgLNH4NO3、0.2～0.3mgLCuSO4·5H2O、36～37mgLFeNaEDTA、6～7mgLH3BO3、22～23mgLMnSO4·H2O、0.2～0.3mgLNa2MoO4·2H2O、8～9mgLZnSO4·7H2O、470～475mgLCaNO32·4H2O、1～3mgL甘氨酸、80～120mgL肌醇、0.4～0.6mgL烟酸、0.4～0.6mgL盐酸吡哆醇、0.8～1.2mgL盐酸硫胺素、20～30gL蔗糖、5～6gL琼脂、0.5～1mgL吲哚-3-丁酸和蒸馏水制成，pH值为5.6。

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