申请/专利权人：元码基因科技(北京)股份有限公司

申请日：2023-11-13

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117230170B

主分类号：C12Q1/6876

分类号：C12Q1/6876;C12Q1/6806;C40B50/06;C12Q1/6869;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2024.01.02#实质审查的生效;2023.12.15#公开

摘要：本发明公开基于定点成环连接的端粒特异性接头、预文库及其构建方法。本发明设计了一种端粒特异性接头，其包括引物结合区和含有封闭基团的端粒特异性结合区，该端粒特异性结合区能够与端粒3’端悬臂的至少部分特异性结合。本发明的端粒特异性接头可识别完整端粒末端，并避免非完整末端被建库。同时，本发明的通用接头设计也可以极大程度地阻止酶切形成的各类非完整端粒片段以及基因组背景碎片的扩增。因此，高效地富集了完整端粒末端序列，从而有效地对其进行序列测定，更真实准确地展示各染色体端粒长度的分布状态，实现更准确的关联分析和解读。

主权项：1.一种基于定点成环连接的端粒特异性接头，其特征在于，包括引物结合区和含有封闭基团的端粒特异性结合区，所述端粒特异性结合区包含能够与端粒3’端悬臂的至少部分特异性结合的序列，所述端粒特异性结合区具有高于55℃的Tm值，所述端粒特异性接头序列的5’端具有磷酸化修饰，该5’端在环化酶的作用下与端粒的3’悬臂的末端形成环结构，所述引物结合区含有巢式引物结合位点，所述引物结合区对应的引物序列的Tm值在55℃-70℃之间，所述接头的3’端含有封闭基团，且封闭基团选自双脱氧核苷、氨基、间臂、磷酸化基团中的任意一种，所述端粒特异性接头进一步包含非标准DNA或RNA类似物，其选自iXNA_A、iXNA_T、iXNA_G和iXNA_C中的至少一种，其中iXNA_A是指对碱基A进行修饰；iXNA_T是指对碱基T进行修饰；iXNA_G是指对碱基G进行修饰；iXNA_C是指对碱基C进行修饰，所述端粒特异性接头序列为AGGATGACAGAATGCCATATGCAAGTCATATGGACCAGTCAATTAACCCTAACCiXNA_CiXNA_TiXNA_A，或AGGATGACAGAATGCCATATGCAAGTCATATGGACCAGTCAATAAiXNA_CCTiXNA_AACCiXNA_CTAiXNA_AC。

全文数据：

权利要求：

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