申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2022-01-18

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN114460189B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.05.27#实质审查的生效;2022.05.10#公开

摘要：本发明涉及一种筛选超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁差异标志物的方法，属于食品领域。一种筛选超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁差异标志物的方法，包括下述步骤：将超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁在相同的条件下进行预处理，得待测样品；利用色谱和质谱联用技术分别检测两组待测样品，获得相应的质谱谱图数据；利用软件Analyst1.6.3处理所得质谱数据，获得各组蓝莓汁中各个代谢物的相对含量；对得到的各组蓝莓汁中各代谢物的相对含量进行主成分分析；对两组代谢物的相对含量数据进行正交偏最小二乘法判别分析，筛选后所得代谢物为差异标志物。色谱与质谱联用可以实现从利用色谱进行物质分离到利用质谱进行物质鉴定的整个流程。

主权项：1.一种筛选超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁差异标志物的方法，其特征在于：①将超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁在相同的条件下进行预处理，得待测样品；利用色谱和质谱联用技术分别检测两组待测样品，获得相应的质谱谱图数据，其中，所述预处理为：将样品从-80℃冰箱中取出解冻后，涡旋10s混匀；取混匀后的样本600μL，置于2mLEP管中，加入600μL70％甲醇内标提取液，涡旋3min；4℃下，12000rmin离心10min；取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤；利用软件Analyst1.6.3处理所得质谱数据，具体为：基于metware数据库，对样本的代谢物进行质谱定性定量分析；用MultiaQuant软件打开多物质提取的离子流谱图，进行色谱峰的积分和校正，获得各组蓝莓汁中各个代谢物的相对含量；②对得到的各组蓝莓汁中各代谢物的相对含量进行主成分分析PCA，以初步了解各组样本之间的总体代谢差异和组内样本之间的变异度大小，主成分分析表明各组间是否存在变异度；③对两组代谢物的相对含量数据进行正交偏最小二乘法判别分析OPLS-DA，筛选差异标志物，OPLS-DA在原始数据进行log2转换后，再进行中心化处理，公式为： 然后利用R软件中的MetaboAnalystR包OPLSR.Anal函数进行分析，计算OPLS-DA模型；基于OPLS-DA的结果，从获得的多变量分析OPLS-DA模型的变量重要性投影VIP可以初步筛选出不同组间差异代谢物，筛选标准为：VIP≥1；同时结合差异倍数值foldchange来进一步筛选出差异代谢物，筛选标准为：选取log2foldchange≥4的代谢物，筛选后所得代谢物为差异标志物；质谱条件如下：于三重四级杆线性离子阱质谱仪AB4500QTRAPUPLCMSMS系统上进行LIT和三重四级杆QQQ扫描；在正离子模式下时，离子源气体IGSI，气体IIGSII和帘气CUR分别设置为50、60和25psi，离子源温度为550℃，离子喷雾电压为5500V，碰撞诱导电离参数设置为高；在QQQ和LIT模式下分别用10和100μmolL聚丙二醇溶液进行仪器调谐和质量校准；QQQ扫描使用MRM模式，并将碰撞气体氮气设置为中等；在负离子模式下时，离子源气体IGSI，气体IIGSII和帘气CUR分别设置为50、60和25psi，离子源温度为550℃，离子喷雾电压为-4500V，碰撞诱导电离参数设置为高；在QQQ和LIT模式下分别用10和100μmolL聚丙二醇溶液进行仪器调谐和质量校准；QQQ扫描使用MRM模式，并将碰撞气体氮气设置为中等；色谱条件如下：色谱柱为AgilentSB-C181.8μm，2.1mm*100mm；以流动相A和B进行梯度洗脱，流动相A相为含有0.1％甲酸的超纯水，B相为含有0.1％甲酸的乙腈，流速为0.35mLmin；柱温为40℃；进样量为4μL；洗脱梯度条件为0.00minB相比例为5％，9.00min内B相比例线性增加到95％，并维持在95％1min，10.00-11.10min，B相比例降为5％，并以5％平衡至14min；所述蓝莓汁来源于Duke蓝莓；所述超高压处理蓝莓汁和热处理蓝莓汁差异标志物，在正离子模式下，包括：飞燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷和1,3,5-苯三酚；在负离子模式下为2-呋喃甲酸、杨梅素-3-O-阿拉伯糖苷、杨梅素-3-O-鼠李糖苷、松柏醇和芥子醇。

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