申请/专利权人：华南农业大学

申请日：2023-05-30

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN116640672B

主分类号：C12N1/14

分类号：C12N1/14;C12N3/00;C12N1/38;A01H4/00;A01C1/08;A01G22/40;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2023.09.12#实质审查的生效;2023.08.25#公开

摘要：本发明公开一种利用豆科植物根系分泌物诱导AM真菌离体产生菌丝体和次生孢子的培养方法。本发明的“多层三明治”夹膜培养体系能有效隔绝异形根孢囊霉孢子侵染紫云英根系，在离体条件下，异形根孢囊霉能摄取根系分泌物并促进其菌丝生长和次生孢子形成。同时，模拟根系分泌物成分营养液能诱导异形根孢囊霉在离体条件下产次生孢子。可见，本发明的方法能在离体条件下扩繁AM真菌，而不需要侵染宿主植物根系，扩繁效率高且能分离纯净孢子便于科学研究，还有操作简单和周期短等优点；因此，利用该方法能实现准确鉴定野生AM真菌的形态特征及菌种分类，扩展丛枝菌根真菌种质资源库，为丛枝菌根真菌的基础与应用研究提供更简便和可行的扩繁方法。

主权项：1.一种利用紫云英根系分泌物诱导丛枝菌根真菌异形根孢囊霉（Rhizophagusirregularis）离体产生次生孢子的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、挑选紫云英种子进行表面消毒，并将种子置于黑暗条件下进行处理，直至种子萌发出0.8～1.2cm长的胚根，再移栽，待长出较多侧根，获得幼苗；S2、对丛枝菌根真菌异形根孢囊霉孢子进行预处理，包括表面灭菌、平均分配数量、黑暗环境培养；S3、设置“多层三明治”夹膜培养体系进行盆栽试验：将步骤S2预处理后的一份孢子注射到一张微孔过滤膜上，再用一张微孔过滤膜将其覆盖，滤膜边缘用强力粘合剂封闭，形成夹心结构，于夹心结构两侧分别放上步骤S1获得的幼苗，再次用两张相同的微孔过滤膜夹住植物形成“多层三明治”夹膜培养体系；将“多层三明治”夹膜培养体系垂直插入放有石英砂的花盆中央，将微孔过滤膜直径的8～10mm暴露在外，用于水和营养液的添加；S4、根据紫云英根系分泌物的成分，配制模拟根系分泌物成分营养液，用于丛枝菌根真菌异形根孢囊霉离体次生孢子形成；S5、将步骤S3中的“多层三明治”夹膜培养体系放在真菌培养室培养，进行盆栽试验，每盆每次浇水，每3天一次；不添加或者添加步骤S4的模拟根系分泌物成分营养液，每盆需隔天注射一次模拟根系分泌物成分营养液到中间含孢子的夹膜中；培养5周以上，离体收集次生孢子；步骤S4中，所述模拟根系分泌物成分营养液的配方为以水为溶剂，调pH至5.5～5.7，每升含有：MgSO4･7H2O：731mg，KNO3：80mg，KCl：65mg，KH2PO4：4.8mg，CaNO32･4H2O：288mg，FeIII-EDTA：8mg，MnCl2･4H2O：3mg，ZnSO4･7H2O：1.3mg，H3BO3：1.5mg，CuSO4･5H2O：0.065mg，Na2MoO4･2H2O：0.0012mg，KI：0.75mg，MES脂肪酸甲酯磺酸盐10mM，Glucose葡萄糖1g，Glycine甘氨酸3mg，Pyridoxine-HCl盐酸吡哆辛0.1mg，Nicotinicacid烟酸0.5mg，myo-inositol肌醇50mg，Thiamine-HCl硫胺素盐酸盐10mg，Peptone蛋白胨1g，肉豆蔻酸钾200μM，独脚金内酯0.1nM，茉莉酸甲酯0.1nM。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南农业大学 一种利用豆科植物根系分泌物诱导AM真菌离体产生菌丝体和次生孢子的培养方法

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