申请/专利权人：沈阳化工大学

申请日：2023-10-17

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117886960A

主分类号：C08B37/00

分类号：C08B37/00;A61P39/06;A61P25/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.03#实质审查的生效;2024.04.16#公开

摘要：具有抗氧化及神经细胞保护活性的北柴胡茎叶多糖制备方法，涉及一种生物多糖制备方法，首先采用热水浸提法从干燥的北柴胡茎叶粉末中得到水提浸膏，去蛋白，脱色后，利用DEAE纤维素柱层析分离，用去离子水和0.1M的NaCl溶液洗脱，并用凝胶柱层析法进一步纯化，最终收集得到1个北柴胡茎叶新多糖BCPS‑1。BCPS‑1的分子量为21.80KDa，由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成。该多糖具有抗氧化活性且可以通过提高损伤细胞中的T‑AOC、SOD、GSH‑Px活力，降低MDA含量，激活Nrf2HO‑1信号通路恢复其抗氧化系统，从而缓解氧化应激，对神经细胞氧化损伤起到保护作用。

主权项：1.具有抗氧化及神经细胞保护活性的北柴胡茎叶多糖制备方法，其特征在于，所述方法包括以下制备过程：将干燥的北柴胡茎叶切碎成粉末，过40目筛，用石油醚（1:10,wv）对其进行回流脱脂（2h次，3次），继续用70%乙醇溶液（1:10,wv）回流去除小分子化合物（2h次，3次），并进行过滤和干燥；滤渣在100℃下用去离子水（1:40,wv）回流提取（2h次，3次），得到粗多糖提取液；采用酶+Sevage法去蛋白，首先吸取1mL粗多糖提取液，将其吹干称重，并将粗多糖提取液配制成80mgmL的溶液；向粗多糖提取液中加入2.5%体积的中性蛋白酶，将其在50℃水浴中恒温反应1h，将温度升高至90℃，使其继续反应10min，并于3000rpm条件下离心15min，收集上清液；按照体积比4：1向收集的上清液中加入Sevage试剂（二氯甲烷：正丁醇=4：1），搅拌30min，并在3000rpm条件下离心15min，收集上清液；重复此操作，直至多糖的蛋白含量不变，得到去蛋白的粗多糖提取液，减压浓缩、干燥；AB-8树脂柱脱色，称取去蛋白后的粗多糖样品10g，溶于去离子水中，将大孔树脂层析柱的液面放至与大孔树脂水平，将溶解好的多糖样品均匀平铺在大孔树脂表面，挂样6h；挂样结束后缓慢加入去离子水，静置10min；打开柱出口阀，以2s滴的流速进行洗脱，直至洗脱液无明显颜色；收集洗脱液，减压浓缩后进行透析（3500Da）、干燥得到粗多糖；用DEAE-52纤维素柱对粗多糖进行分离，称取500mg脱色素的粗多糖样品，用去离子水溶解；将DEAE层析柱液面放至与DEAE纤维素平齐，将溶解好的多糖样品均匀平铺于DEAE纤维素表面，挂样6h，依次缓慢加入去离子水和0.1molLNaCl对多糖样品进行洗脱；用自动接样器在试管中收集洗脱下来的样品，流速为1.0mLmin，直至无明显颜色；用苯酚硫酸法对收集的样品进行多糖含量的监测，绘制洗脱曲线，并根据洗脱曲线收集对称峰，合并滤液进行减压浓缩、透析（3500Da）、干燥；采用SephadexG-200柱对所得的馏分进行纯化，称取100mg过完DEAE的粗多糖样品，用去离子水使其溶解；将SephadexG-200层析柱液面放至与SephadexG-200平齐，将溶解好的多糖样品均匀平铺在SephadexG-200表面，挂样6h；向挂样结束的层析柱中缓慢加入去离子水，静置10min，打开柱下方阀门，用自动接样器以0.7mLmin的速度收集洗脱下来的样品，直至洗脱液无明显颜色；用苯酚硫酸法对试管中收集的样品进行多糖含量的监测，并绘制洗脱曲线；根据洗脱曲线收集对称峰，合并滤液后减压浓缩、透析（3500Da）、干燥，得到1个北柴胡茎叶新多糖（BCPS-1）；上述得到的北柴胡茎叶新多糖，其分子量为21.80KDa，且BCPS-1由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成，其质量百分比为21.90%、12.93%、2.06%、9.94%、4.00%、13.48%、35.69。

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权利要求：

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