申请/专利权人：北京橘井健康科技集团有限公司

申请日：2021-12-31

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114225001B

主分类号：A61K36/9068

分类号：A61K36/9068;A61P1/10;A61P1/16;G01N30/06;G01N30/74

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.04.12#实质审查的生效;2022.03.25#公开

摘要：本发明在大柴胡汤汤剂制备方法的筛选过程中，首次引入Q‑markers概念，并根据Q‑markers筛选结果，将与大柴胡汤药效相关的主要活性物质柴胡皂苷B2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷作为筛选大柴胡汤汤剂制备方法的主要功效标志物，通过单因素分析和正交设计筛选出了一种改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，通过该方法制备的大柴胡汤汤剂和解少阳、内泻热结功效显著提高。

主权项：1.一种改良的大柴胡汤汤剂制备方法的筛选方法，其特征在于：所述筛选方法包括以下步骤：1通过大柴胡汤功效Q-markers精准分析发现与特定功效对应的一种或多种活性成分；2以步骤1中的与特定功效对应的活性成分作为药效标志物Q-markers，利用高效液相色谱法测量采用候选煎煮条件制备得到的大柴胡汤汤剂中所述Q-markers的含量；和3选择所述大柴胡汤汤剂中所述Q-markers的含量较高和出膏率较高的煎煮条件，将其作为改良的大柴胡汤汤剂的制备方法，所述Q-markers为柴胡皂苷B2、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和芍药苷，所述特定功效为大柴胡汤和解少阳、内泻热结的功效，所述候选煎煮条件是通过APH-CRITIC混合加权方法和正交设计获得的，所述煎煮条件为浸泡时间、加水量、煎煮次数和煎煮时间，具体为：采用APH-CRITIC混合加权方法，得到评价指标Q-markers的含量及出膏率的权重系数为二者权重系数的乘积占乘积之和的比例，从而对其进行综合评价；将AHP法和CRITIC法分别得到的权重系数进行混合加权，既反映了中药复方君臣佐使的配伍规律，又客观反映了各组分间的相互作用；大柴胡汤中的柴胡为君药，其对应指标成分柴胡皂苷B2作为第一层次；枳实、黄芩为臣药，含有柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素，作为第二层次；白芍为佐药，含有芍药苷为第三层次；浸膏得率为第四层次，获得各项指标的AHP的权重系数，一致性比例因子CR＝0.0022771＜0.10，表明此判断矩阵具有满意的一致性，权重系数有效；计算柴胡皂苷B2、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芍药苷、浸膏得率9项指标的权重系数分别为0.2123、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.1146、0.0611、0.0387；CRITIC法是一种客观权重赋权法，可以客观的计算出各指标的权重系数，可以消除主观确定权重系数的人为因素；首先对数据进行无量纲化处理，即指标性成分无量纲化数据＝实测值－最低值最高值－最低值×100；用SPSS22.0统计软件处理无量纲化数据，得相关系数矩阵，计算相关数据：各指标对比强度si、冲突性δi、综合权重ci与权重ωi；AHP-CRITIC混合加权法确定权重系数：大柴胡汤由多味药组成，将AHP法和CRITIC法分别得到的权重系数进行混合加权，既反映了中药复方君臣佐使的配伍规律，又客观反映了各组分间的相互作用，AHP-CRITIC混合加权法较单用AHP法和CRITIC法确定权重系数更加科学合理；即ω综合＝ωAHPωCRITIC∑ωAHPωCRITIC，ωAHP表示AHP法计算的权重系数，ωCRITIC表示CRITIC法计算的权重系数，通过计算得胡皂苷B2、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芍药苷、浸膏得率9项指标的权重系数分别为0.2469、0.0791、0.0772、0.0887、0.0781、0.0741、0.1312、0.1937、0.0311；在正交设计中，综合评分＝∑成分含量成分最大含量×综合权重系数；制备所述大柴胡汤所需的各种中药材为柴胡、黄芩、芍药、半夏、枳实、生姜、大枣和大黄，所述HPLC包括以下步骤：1将大柴胡汤制成供试品溶液：将待测大柴胡汤煎液定容于250mL容量瓶中，精密量取1mL，置10mL的容量瓶内，加入一定量有机溶剂，摇匀，超声提取10min，静置，放冷，用有机溶剂定容至刻度线，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液；2制备对照品溶液：精密称取芍药苷对照品11.30mg、柚皮苷对照品11.26mg、橙皮苷11.30mg、新橙皮苷10.90mg、黄芩苷11.55mg、汉黄芩苷5.30mg、柴胡皂苷B25.36mg、黄芩素4.80mg置于10mL容量瓶内，加有机溶剂使溶解并定容摇匀，作为储备液，精密移取上述储备液各1mL，置10mL容量瓶中，有机溶剂定容，摇匀，即得混合对照品溶液；以及，3对所述供试品溶液和所述对照品溶液进行HPLC检测，以测定大柴胡汤Q-markers的含量：其中，HPLC检测的色谱条件如下所示：采用ODS-C18硅胶色谱柱，以A相乙腈和B相0.05％磷酸水溶液作为流动相，紫外检测器，检测波长为230nm-280nm，流速1.0mL·min-1，柱温：25-35℃，进样体积10μL，在所述HPLC的步骤1和步骤2中的有机溶剂为甲醇，在所述HPLC的步骤3中采用的洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件为：0-5min，3％-3％A；5-10min，3％-10％A；10-15min，10％-12％A；15-25min，12％-16％A；25-30min，16％-16％A；30-50min，16％-20％A；50-55min，20％-20％A；55-75min，20％-25％A；75-85min，25％-46％A；85-90min，46％-85％A；90-100min，85％-85％A，在所述HPLC的步骤3中，使用ODS-C18硅胶色谱柱，规格为4.6×250mm，5μm，检测波长如下所示：芍药苷230nm，柴胡皂苷B2254nm，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、黄芩素和汉黄芩苷280nm，柱温为30℃。

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