申请/专利权人：烟台恒源生物股份有限公司;山东省食品发酵工业研究设计院

申请日：2022-06-28

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114921505B

主分类号：C12P13/06

分类号：C12P13/06;C12N9/88;C07C227/40;C07C227/42;C07C229/08;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.09.06#实质审查的生效;2022.08.19#公开

摘要：本发明提供一种L‑丙氨酸高效酶转化及提取工艺，包括游离细胞法酶转化反应、脱色、重结晶等步骤，具体操作如下：产L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的睾丸酮丛毛单胞菌HY‑08D菌株发酵培养，以培养液作酶源，直接添加固体L‑天冬氨酸，加入细胞通透剂EDTA和吐温‑80，加入酶稳定剂磷酸吡哆醛，转化培养，L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶酶活达到55000~70000U，培养液经过脱色、重结晶、干燥得到成品L‑丙氨酸。

主权项：1.一种L-丙氨酸高效酶转化及提取工艺，其特征在于：具体操作步骤为：（1）游离细胞培养液制备取本单位一株睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D菌株活化并进行高密度发酵培养，获得游离细胞培养液，测定酶活力为45000~58000U，取1L游离细胞培养液进行后续酶转化反应，所述睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D菌株保藏编号为:CGMCCNo.6083；（2）游离细胞培养液活化向上述游离细胞培养液中加入细胞通透剂，细胞通透剂为EDTA和吐温-80；所述EDTA的加入量为1.0%;然后加入L--天冬氨酸-β-脱羧酶稳定剂，稳定剂为磷酸吡哆醛，调整pH为6.0，测定酶活力为55000~70000U；所述吐温-80的加入量为0.15%；所述磷酸吡哆醛的加入量为1mM；（3）酶转化反应直接向步骤（2）游离细胞培养液中添加固体L-天冬氨酸，采用pH自动控制加液系统，在线监控反应pH值，通过PID控制器自动补加L-天冬氨酸，严格控转化液pH在5.5-6.0之间，进行酶转化反应；L-丙氨酸的等电点pI=6.02，在整个酶转化过程中L-丙氨酸晶体不断析出，本工艺最终L-天冬氨酸转化率可达400~450%；（4）脱色将步骤（3）获得的转化液过滤收集粗晶体，用去离子水溶解，调整pH4.5~5.0、温度50~55℃、L-丙氨酸浓度为15%~18%，加入质量分数为0.8~1.0%ZX-303活性炭脱色20~25min，脱色率可达82.0%以上；（5）重结晶将经净化处理的L-丙氨酸溶液pH调整至6.0，进行真空蒸发结晶，温度60℃，真空度-0.07MPa；将获得的L-丙氨酸晶体，离心，干燥得到成品L-丙氨酸，纯度达99.9%。

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