申请/专利权人：上海市生物医药技术研究院;临港国家实验室;上海南方模式生物科技股份有限公司

申请日：2023-11-21

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN117904194A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/65;A01K67/0276;A61K49/00;A61K45/00;A61P31/04;A61P11/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种IL34基因缺陷小鼠模型的制备方法及其应用。在本发明中利用基因修饰的技术，在IL34基因第一个外显子定点插入Luciferase‑2A‑EGFP‑SV40polyA表达框从而导致内源的IL34基因失活。进一步实验验证了该基因被有效失活。该基因缺陷小鼠模型遗传稳定，可用于研究IL34基因在小鼠体内的生理和病理功能。特别对于揭示该基因调控的炎症信号通路以及验证其是否作为抗炎药物开发靶点具有重要的作用。

主权项：1.一种IL34基因缺陷小鼠模型的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：a.靶位点筛选：筛选得到低脱靶风险的gRNA靶位点，所述gRNA靶位点的序列信息如SEQIDNO:1-2所示；b.同源重组载体构建，根据获得的gRNA位点及插入位点信息，构建同源重组载体；Ⅰ.构建基因敲入片段：从左到右依次连接5’同源臂、Luciferase、2A肽、EGFP、Sv40polyA和3’同源臂构建得到基因敲入片段；Ⅱ.构建同源重组载体：通过In-Fusioncloning的方法，将5’同源臂、Luciferase-2A-EGFP-SV40polyA和3’同源臂连入质粒载体，获得同源重组载体；c.基因敲入小鼠构建：将构建得到的同源重组载体和Cas9gRNA表达载体混合后转染进入胚胎干细胞，转染后的ES细胞进行扩增培养，PCR筛选获得正确同源重组的阳性ES细胞；将阳性ES细胞注射进小鼠的囊胚中，PCR筛选获得F0代重组阳性小鼠；将F0代阳性小鼠与野生型小鼠交配，繁育后，PCR筛选获得F1代重组阳性小鼠。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海市生物医药技术研究院;临港国家实验室;上海南方模式生物科技股份有限公司 一种IL34基因缺陷小鼠模型的制备方法及其应用

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