申请/专利权人：华中科技大学

申请日：2022-05-16

公开（公告）日：2024-04-19

公开（公告）号：CN114958900B

主分类号：C12N15/81

分类号：C12N15/81;C12N15/65;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.19#授权;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开

摘要：本发明公开了一种解脂耶氏酵母无标记整合载体及其应用用，属于微生物基因工程领域。该整合载体包括重组反应区，重组反应区包括从5’至3’顺序的左臂突变型lox序列、待剔除DNA片段和右臂突变型lox序列；左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列方向相同；待剔除DNA片段包括解脂耶氏酵母筛选标记、Cre基因诱导表达盒、大肠杆菌筛选标记和复制起点；所述左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列能在所述载体整合至解脂耶氏酵母基因组后，在Cre重组酶作用下切除左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列之间的序列，并在基因组上生成双臂突变型lox序列。本发明仅需单个载体即可高效便捷地实现基因的无标记整合，为在解脂耶氏酵母体内整合多个基因提供了极大的便利。

主权项：1.一种解脂耶氏酵母无标记基因整合载体，其特征在于，该整合载体包括重组反应区，所述重组反应区包括从5，至3，顺序的左臂突变型lox序列、待剔除DNA片段和右臂突变型lox序列；所述左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列方向相同；所述待剔除DNA片段包括解脂耶氏酵母筛选标记、Cre基因诱导表达盒、大肠杆菌筛选标记和复制起点；所述Cre基因诱导表达盒包括从5，至3，顺序的解脂耶氏酵母诱导型启动子、乳糖操纵基因序列lacO、Cre基因和终止子；利用所述乳糖操纵基因序列lacO可在含lacIq抑制子的大肠杆菌宿主中阻遏其下游基因表达的特性，避免Cre基因在大肠杆菌的泄露表达；所述左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列能在所述载体整合至解脂耶氏酵母基因组后，在Cre重组酶作用下切除左臂突变型lox序列和右臂突变型lox序列之间的序列，并在基因组上生成双臂突变型lox序列；所述整合载体在所述重组反应区外，还包括目的基因表达盒和同源片段，所述同源片段为解脂耶氏酵母宿主基因组中的序列，且其内部含有至少一个在所述整合载体上唯一存在的酶切位点。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中科技大学 一种解脂耶氏酵母高效无标记基因整合载体及其应用

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