申请/专利权人：天津师范大学

申请日：2015-09-01

公开（公告）日：2015-12-23

公开（公告）号：CN105177019A

主分类号：C12N15/29(2006.01)I

分类号：C12N15/29(2006.01)I;C12N15/84(2006.01)I;A01H5/00(2006.01)I;A01H5/12(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2022.08.12#未缴年费专利权终止;2018.10.26#授权;2016.01.20#实质审查的生效;2015.12.23#公开

摘要：本发明公开了一种OsHox10基因在水稻株型建成控制叶片形态方面的应用。其中包括HD-Zip III家族成员OsHox10基因的核苷酸序列，其特征在于OsHox10基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsHox10编码一个839个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No 3所示。本发明采用反向遗传学的方法初步探索了水稻HD-Zip Ⅲ亚家族成员OsHox10的功能，发现过量表达OsHox10，能使水稻分蘖数增多，叶片形态发生变化。表明OsHox10基因对水稻的株型建成及控制叶片的形态具有重要的作用。

主权项：HD‑Zip III家族成员OsHox10基因的核苷酸序列，其特征在于OsHox10基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsHox10编码一个839个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No 3所示。

全文数据：OsHoxlO基因在水稻株型建成控制叶片形态方面的应用[0001]本研究得到国家自然科学基金项目（No.31171515及天津市中青年骨干教师创新培养计划No.ZX110GG017的资助。技术领域[0002]本发明涉及水稻HD-ZipIII家族成员影响植物的多种生长发育现象研究的技术领域，更确切地说是OsHoxlO基因在水稻株型建成控制叶片形态方面的应用。背景技术[0003]OsHoxlO是水稻HD-ZipIII家族成员之一。HD-Zip家族是植物中最大的一个同源异型域转录因子家族。根据结构域的保守性、空间结构的差异性、与DNA结合的特异性以及生物学功能，，可以将众多的HD-Zip蛋白分为HD-ZipI、HD-Zipn、HD-ZipΙΠ和HD-ZipIV四个亚家族Arieletal.2007。[0004]已有的研究资料表明HD-Zip家族成员影响植物的多种生长发育现象，它们的表达常受低温、激素诱导、光照、逆境等因素的诱导，主要参与光信号、激素信号介导的途径，对植物的生长发育起调控作用。例如模式生物拟南芥C4raWcopsisthaiiana的ATHB6和ATHB7在幼苗期组成型表达，但表达水平低，当受到水分胁迫、外源ABA刺激等外界因素影响时，它们的表达量便迅速上升，并且主要集中在叶原基和根、茎、花的细胞分裂分化旺盛的区域（FedericoD.Arieletal.2007。[0005]水稻（Oryzasatira的HD-Zipin亚家族中也存在5个基因，分别为0sHox9、〇8!1«10、〇8!1«32、〇8!1«33。本发明采用反向遗传学的方法初步探索了水稻!1〇-2丨口111亚家族成员OsHoxlO的功能，发现过量表达Osifod0,能使水稻分蘖数增多，叶片形态发生变化。表明OsifodO基因对水稻的株型建成（如分蘖数的多少）及控制叶片的形态具有重要的作用。发明内容[0006]本发明的目的在于提供HD-ZipIII家族成员OsHoxlO基因及其应用。[0007]本发明的上述目的是通过如下的方法予以实现：[0008]HD-ZipIII家族成员OsHoxlO基因的核苷酸序列，其特征在于OsHoxlO基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示，OsHoxlO编码一个839个氨基酸的蛋白质序列为SEQIDNo3所不。[0009]本发明所述HD-ZipIII家族成员OsHoxlO基因的mRNA序列为SEQIDNo.2所示。[0010]本发明进一步公开了HD-ZipIII家族成员OsHoxlO基因在制备水稻株型建成及控制叶片形态方面的应用。[0011]本发明所述OsifoJdO的基因序列如下（SEQIDNo.1所示）：[0012]ATGGCTGCGGCAGTGGCAATGCGAGGGAGTAGCAGTGATGGAGGTGGCTATGATAAGGTTTCCGGGATGGACTCCGGTAAATATGTGCGCTACACGCCTGAGCAGGTGGAGGCGCTTGAGCGGGTGTACGCCGATTGCCCCAAGCCAACCTCCTCCCGCAGGCAGCAACTGCTGCGTGAGTGCCCCATACTTGCTAACATTGAGCCCAAGCAGATCAAGGTCTGGTTCCAGAACAGAAGGTAATGATAATAGAATTGAATCTTTCTACGTTTGTTCTCTGTGACAAAAACTTGTTATGGCAGTTTTCCCTGATTGTTTCATCTGTCACCTGAAATAACATTTCGTTAGTTTCCTTCTGGGGAGGCTATGGTTCTAATATGCTGCGTTGTTGTTGTGATGATGAGCGGTATTTTGATATGAGGGGAGCTGCAATGCCAATTGTTTATCATTTCATTTGTTTGCGCACCAGCAAAATGTAGTATAATTACTTTAGCTGACGGCTCTGCATGTATATGATTTTTTCGTTTTTCATGTTCGCTGAAGTGGATACTTGTGCTTGTGTTGCTCTAGGTGCCGGGATAAGCAGCGGAAGGAGTCTTCACGGCTTCAGGCTGTCAACAGGAAATTGACGGCAATGAACAAGCTACTTATGGAAGAGAATGAGCGACTCCAGAAGCAGGTCTCCCAATTGGTTCATGAGAATGCCCACATGCGACAGCAGCTGCAGAATGTAAGCTCTTGATGTGCTGGTGCTGATGTTGTCCCCCATGCATAAACATGTTCTCACTGAAATGCTATCTATTCTTTGTGCATTTTGTTATACGCATGGCATGTCCGGGGATGTGTTGTTCTGTACTGTATATTGTAGATTAGTATAACTTTAAAATTTGATGTATGTGTAGCTATACCAGCTGGGGCCATATGCGTCAGTTCCTTTAGAATTGATATATGAATTAATCCTCAGAATGTCCATGAGATCGCTAGATTTCACTGATAACACCACTTGCTTGGGTGCAGACTCCGCTGGCAAATGATACAAGCTGTGAATCAAATGTGACTACCCCTCAAAACCCTTTAAGGGATGCAAGTAACCCCTCTGGGTAAGTAAATAGTTCTGAGTGACTCAGGTAGAATTATTGTTGGATGGACTTGCTCTTTCGATATCATGCTATCTTAACTGCCTTTTATCTTGTTCTAGGCTCCTTTCAATTGCAGAGGAGACCTTGACAGAGTTCCTCTCAAAGGCTACTGGTACAGCTATTGATTGGGTCCAGATGCCTGGGATGAAGGTTCCATGCTAGCACTGTTTGTTTTTTTGTTCTGTGATTTGTGCTAAGAGGTTTTTACTTGAAGTGCTTACTACCCTTTTGTTTTCATGATGTAAGCCTGGTCCGGATTCGGTTGGTATTGTGGCCATTTCACATGGTTGCCGTGGTGTTGCTGCCCGTGCCTGTGGTTTGGTGAACCTAGAACCAACAAAAGTAAGTGTTGTAGCTATTTGGGTACATGGGTTTGGTATTTTTATGTTACCTCAGTATTCCCTGTCTGTATGTTTTCTGAAGCATCTATTTTGGGTGATAGCAAGCCTATCCACCAGTCACTTAGTTTTCTTTGTGTGCAAATGGTTAGAAACCTACTACCTCCATCCCAAAATATAGCCAAAAGTTGCTATATCAAAAATCCTATCAGAAGTGCCTCCTGAACACATTGCTGCCGAGTGTGGAATTAAGACACACTGTAATTCACTTTAATAAATACTAAACTTTGAAGATGTCACTTTAGAGGTCTAATGATTTCATGTCTGCCAACTGTTATCATCAAATTTAATCGTGAAGATAAGCAGATATCTTGCTTTTTTTGTTACTTTATTCAGGAGATTTTGTGTCTCATAGAACTTTGTTACGTAGGTGGTAGAGATATTGAAAGATCGTCCATCTTGGTTCCGTGATTGTCGAAACCTGGAAGTCTTTACAATGATTCCAGCAGGAAATGGAGGAACGGTTGAACTTGTCTACACACAGGTGAACACTGTTTCATTTTACATTGTATAATGGTATATCCTCAGTCTTCTCTATCAATGCATGTGCTTCATGCCATGAACATTATTACTTGTTTTTGCTTACAGTTGTATGCTCCAACAACTTTAGTTCCTGCACGAGATTTTTGGACGTTACGGTACACAACCACAATGGAAGATGGCAGTCTTGTGGTATGTATGAACATGAACACTGTTTTCACCCCACAATGAGTCTCAATGTGATGTTACCCTTGCTAATATTCCTCCATCTCCAAGGTCTGTGAGAGATCTTTAAGTGGTTCAGGGGGCGGTCCAAGTGCTGCCTCTGCTCAGCAATATGTGAGAGCGGAAATGCTTCCAAGTGGATACCTGGTTCGCCCATGTGAAGGTGGGGGATCAATTGTGCACATAGTGGACCATCTGGATCTTGAGGTATTTTTCACACTTTTGTACAGTTGAACCATGTTTTTTGTCCTTTGATGTAGGACCATTTTTGTATCCTGTCAAACTAATAATACAATTTGGTTTAATCTTTCAGGCATGGAGTGTTCCTGAGGTGCTTCGGCCACTCTATGAATCTTCAAGGGTAGTCGCTCAGAAAATGACTACTGCGGTAAGCTGTCGTGAAATGATATTCAGCTCAAATTTCATTGATGTGATTACAAGTTCATCATTTCAAGTGAAACTTGTTTTTAATGAACTCTTCAAGTTTCATAACATTGGATTTTTTTTTAGAAAAAATAAAATAAAAATCCAATATTATGAAACTTGAAGAGTTCAAGCTAATGATAAAGTTTGTGTTTTGGATAAAGCTTATAATATTGGATATGTGGTGAAAATGATTTATATGGGTTGGTACAACTAATGATAAAATTTGCCTTTTGGATATGTTGAACAGTTCATTTTCTGCAATCTACTTTATACTAACCTTTTATTGTCTATCCTATATATCAAGGCACTCCGGCACATCAGACAAATTGCTCAAGAAACAAGTGGGGAAGTGGTGTATGCCTTGGGGAGGCAACCAGCAGTGCTACGGACTTTTAGTCAAAGGCTGAGCAGGTGATTTTTTTATAAATTATTACTCAGCAATTAATATTTTTTTCACCTGTTTAATCTAACACCAATATTATGCTTTTCTTAGAGGCTTTAACGATGCCATTAGTGGTTTCAATGATGATGGGTGGTCTATAATGGGCGGAGACGGTGTTGAAGATGTAGTTATTGCTTGCAACTCAACTAAGAAAATTAGGAGTAACAGCAATGCTGGCATCGCCTTTGGAGCCCCCGGAGGTATTATATGTGCTAAGGCATCAATGTTACTGCAGGTAAGGGTAATCATTATCAGCTCATTAGGGTGCAGATGACCCCTCTGTATGTAGCGTCATTTTCCAAGGAAGGGAAAAAAAAACTTTTTTAGTGATTCAACATATGCAAGCACATAAATAAATTGCTCGGCTGTATTAACATTTGATAGTGAGATCCTAATGAGATTTTTGATGTTTTGCCTGGTCCTACACCTGATGATAATTTGTTTGATTTATTTCATTACTTTCTTTTTTGCGGAGAAACTTATTTCATAAAACTGCTGTCATCGCTGGTGTGAATATAAAAGCAGTGTCACAAAAGTTTTTTCCTCAGAGACATTGAACACACAGAATGAGTTCTTTGGAACTAGATTTCCATGTTCAAAACTTGTAGCTGTTAAATCATGTTAATCCATACGTCTTCTTTTCCTTCTTTGGTATTTCAGAGTGTTCCTCCAGCAGTACTGGTTCGATTTCTGAGGGAGCATAGATCTGAATGGGCCGATTACAATATTGATGCATATTTGGCTTCAACTCTGAAAACAAGTGCATGTTCACTTACTGGGTTGCGACCCATGAGATTTTCTGGGAGCCAAATCATCATTCCACTTGCTCACACAGTTGAGAATGAGGAGGTATATTTTCCTGAATATGGGGAAAGTCTGTTTTTTGTGCGCTTGTTGCTGTTGAACTGATTTGAGTAATGGTTATAGCAAACTACTTATTTTCATTCTTGCTGATCTGTTTACATTGTCATAGTGGATAGTGACTATCTAGTTAATTCCATTGTCGGACATAGTTTTGTTATTATTGATTTATTTTCATTAACTTGAAAAAAAAACGAACAGATTCTTGAAGTTGTTCGCCTTGAGGGTCAACCTCTTACTCATGATGAAGCTCTTCTTTCAAGGGATATCCACCTGCTTCAGGTAAGACACTAAATGCCATTGCTATGTTTTTTGTCTGTATATGTACTGTGTTGCTTCTCAATTGAGAAAACTAGTAGCTTTTAATACATGTAATTTCTTGCTTAATATGTTGATCATTGTATCTATTCGTGAGCATCTTTGGCTCTATTTCATCTTATCAAATTATTGTAGAGTTAAATATGCTGTGTAACAACTACCAACCCATAAGCCTATCTTTATCCGGGCATATTAAGTTTGTTGCTACACCCTTTTTTCCCCCTTCGAAGTACAGTCAAAGATGCAAAGCTTTTTATGAGGCTTGTAAATATTCCAGTTTGCTAATATACCCTTATCTTTTGCAGCTCTGCACTGGAATAGACGAGAAGTCTGTGGGATCCTCCTTTCAGCTTGTGTTTGCACCGATTGATGATTTCCCAGATGAAACTCCATTGATTTCTTCTGGCTTCCGTGTTATACCACTTGATATGAAAACAGTTAAGTGCTGCCAAATTCCAAATTACATTATCCATTACCCTTTTGACTGTTCCCTAGGTCCATATGTGCTTTATTTGCTGTTGCATTAATCTGTGATGAGTCGTGAATGTCTTTTAGCTTTTCTAGGAACCTCAGTTTTATTCATTTGTTCAGTGAGTTAACCCTGGCCAATTTTAACTCTTCATAAACAATTGTTTTGGTTGTTCTAAGACAAATAATCTCTTGGAAATGTTTCATTTATTCTCCCCTCTAGTCCGCTTTAAATGTTCCAGCTCTGTCCACAGAGACCCCAAAAAAAAGCTATTTTGTAAACTCCCATTAAATTGAGAAAAAAAACTGTTAAATTGGTTATTTGCATCTTGATTGTATCACCAGTTAGAACTAATAGAGGCATTTGGTTTCAAATATTCCCTTGGAAAAATAAAGCAAGTATGTATGAACCAAGCTTGCTAAAATGTTTATCCTTTTTGAACCAGAGGTAGTACTATATTTTTGGTCGGCTGCCACTAAATTTTTAGGCTCTGTGCCCAAAAGTTTAACCGTCACATTTCATGCAGGATGGTGCATCCTCTGGTAGGACATTAGATTTGGCATCTAGTCTTGAAGTAGGTTCAGCAACAGCTCAAGCCTCCGGAGATGCATCTGCAGATGATTGTAACTTGCGATCTGTTCTGACGATCGCTTTTCAATTCCCTTACGAGTTGCATCTCCAAGACAGTGTTGCAGCTATGGCTCGCCAATATGTCCGTAGCATTGTTTCTGCTGTGCAAAGAGTGTCAATGGCTATCTCTCCCTCTCAAACTGGTCTAAATGCCGGACAGAGGATAATCTCTGGTTTCCCTGAAGCAGCAACCCTTGCTCGATGGGTTTGCCAGAGCTACCAGTAAGTGTACTCGTAGTTTCTTCCTGTGCAGTAGTGATGATATTTAATAAGAATAAATTTGATAGTTTTCCATGTTGGTTGCAAGCTGACAAAATATTATTATGCCGTCGCTCAGTTACCATCTAGGGGTAGAGTTACTTAGTCAATCAGATGGAGATGCAGAACAATTGTTGAAGATGCTATGGCATTACCAAGATGCTATTTTGTGCTGCTCATTCAAGGTATCTGATGAATTCAACTCGATCAATGTTCCATCATTTGATCTAATCTCATTTAGTCTATTAAGTACTATTACAGACCACTCGATCAATGTTTACCCATGTATTACAGACCACTCGATCAATGTTTACCCATGTACTCTAAAACTTATCGCTTGTCCAGCTGACCTACAATCTTTTCATGCATTTTTCAATCTAACAAAAACTGGCTCTGTTAATAATAACCTAATAGTTAGAAAGAACTGGCTCTGTTAATAATGACCTAGTAATAGTTAGTACTTAGTACAGACCTAACGAGTGCTTAGACCCTCAAACGTGTTTTCAACAGGGTGATTTTGCTATATTTTTCCCTTTGAGTAAATGCTCTCAATTTTTTGTAAGGTTTACACTTTTGACACTAATGCGATCATCGGACCACAATATTTGCTATCTTGTATGACAGAAATGTTTTGGTTTCTTTCAGGAAAAACCGGTGTTTACATTTGCCAACAAAGCAGGACTGGACATGCTAGAAACTTCCCTTGTCGCCTTACAGGACCTCACATTGGACAGGATCTTTGATGAGCCTGGAAAAGAAGCATTGTTCTCAAACATTCCCAAATTGATGGAGCAGGTAGAAACTCCTTTTCGCTTAACTCACACCCTTAAGTGCATCATATTTCAGAAATCGCTGAGTTGAAATAAATTAAAATTATGTTACATTGCTTACCATTTTTTTCCCTGTTTTGTGTTTAGGGCCATGTCTACCTGCCATCAGGCGTGTGCATGTCAGGAATGGGTCGGCATGTTTCTTTCGATCAGGCCGTGGCTTGGAAAGTGCTTGCCGAGGATAGCAATGTTCACTGCCTGGCCTTCTGTTTCGTCAACTGGTCCTTTGTGTGA[0013]本发明所述OsfojdO的mRNA序列如下（SEQID吣.2所示）：[0014]ATGGCTGCGGCAGTGGCAATGCGAGGGAGTAGCAGTGATGGAGGTGGCTATGATAAGGTTTCCGGGATGGACTCCGGTAAATATGTGCGCTACACGCCTGAGCAGGTGGAGGCGCTTGAGCGGGTGTACGCCGATTGCCCCAAGCCAACCTCCTCCCGCAGGCAGCAACTGCTGCGTGAGTGCCCCATACTTGCTAACATTGAGCCCAAGCAGATCAAGGTCTGGTTCCAGAACAGAAGGTGCCGGGATAAGCAGCGGAAGGAGTCTTCACGGCTTCAGGCTGTCAACAGGAAATTGACGGCAATGAACAAGCTACTTATGGAAGAGAATGAGCGACTCCAGAAGCAGGTCTCCCAATTGGTTCATGAGAATGCCCACATGCGACAGCAGCTGCAGAATACTCCGCTGGCAAATGATACAAGCTGTGAATCAAATGTGACTACCCCTCAAAACCCTTTAAGGGATGCAAGTAACCCCTCTGGGCTCCTTTCAATTGCAGAGGAGACCTTGACAGAGTTCCTCTCAAAGGCTACTGGTACAGCTATTGATTGGGTCCAGATGCCTGGGATGAAGCCTGGTCCGGATTCGGTTGGTATTGTGGCCATTTCACATGGTTGCCGTGGTGTTGCTGCCCGTGCCTGTGGTTTGGTGAACCTAGAACCAACAAAAGTGGTAGAGATATTGAAAGATCGTCCATCTTGGTTCCGTGATTGTCGAAACCTGGAAGTCTTTACAATGATTCCAGCAGGAAATGGAGGAACGGTTGAACTTGTCTACACACAGTTGTATGCTCCAACAACTTTAGTTCCTGCACGAGATTTTTGGACGTTACGGTACACAACCACAATGGAAGATGGCAGTCTTGTGGTCTGTGAGAGATCTTTAAGTGGTTCAGGGGGCGGTCCAAGTGCTGCCTCTGCTCAGCAATATGTGAGAGCGGAAATGCTTCCAAGTGGATACCTGGTTCGCCCATGTGAAGGTGGGGGATCAATTGTGCACATAGTGGACCATCTGGATCTTGAGGCATGGAGTGTTCCTGAGGTGCTTCGGCCACTCTATGAATCTTCAAGGGTAGTCGCTCAGAAAATGACTACTGCGGCACTCCGGCACATCAGACAAATTGCTCAAGAAACAAGTGGGGAAGTGGTGTATGCCTTGGGGAGGCAACCAGCAGTGCTACGGACTTTTAGTCAAAGGCTGAGCAGAGGCTTTAACGATGCCATTAGTGGTTTCAATGATGATGGGTGGTCTATAATGGGCGGAGACGGTGTTGAAGATGTAGTTATTGCTTGCAACTCAACTAAGAAAATTAGGAGTAACAGCAATGCTGGCATCGCCTTTGGAGCCCCCGGAGGTATTATATGTGCTAAGGCATCAATGTTACTGCAGAGTGTTCCTCCAGCAGTACTGGTTCGATTTCTGAGGGAGCATAGATCTGAATGGGCCGATTACAATATTGATGCATATTTGGCTTCAACTCTGAAAACAAGTGCATGTTCACTTACTGGGTTGCGACCCATGAGATTTTCTGGGAGCCAAATCATCATTCCACTTGCTCACACAGTTGAGAATGAGGAGATTCTTGAAGTTGTTCGCCTTGAGGGTCAACCTCTTACTCATGATGAAGCTCTTCTTTCAAGGGATATCCACCTGCTTCAGCTCTGCACTGGAATAGACGAGAAGTCTGTGGGATCCTCCTTTCAGCTTGTGTTTGCACCGATTGATGATTTCCCAGATGAAACTCCATTGATTTCTTCTGGCTTCCGTGTTATACCACTTGATATGAAAACAGATGGTGCATCCTCTGGTAGGACATTAGATTTGGCATCTAGTCTTGAAGTAGGTTCAGCAACAGCTCAAGCCTCCGGAGATGCATCTGCAGATGATTGTAACTTGCGATCTGTTCTGACGATCGCTTTTCAATTCCCTTACGAGTTGCATCTCCAAGACAGTGTTGCAGCTATGGCTCGCCAATATGTCCGTAGCATTGTTTCTGCTGTGCAAAGAGTGTCAATGGCTATCTCTCCCTCTCAAACTGGTCTAAATGCCGGACAGAGGATAATCTCTGGTTTCCCTGAAGCAGCAACCCTTGCTCGATGGGTTTGCCAGAGCTACCATTACCATCTAGGGGTAGAGTTACTTAGTCAATCAGATGGAGATGCAGAACAATTGTTGAAGATGCTATGGCATTACCAAGATGCTATTTTGTGCTGCTCATTCAAGGAAAAACCGGTGTTTACATTTGCCAACAAAGCAGGACTGGACATGCTAGAAACTTCCCTTGTCGCCTTACAGGACCTCACATTGGACAGGATCTTTGATGAGCCTGGAAAAGAAGCATTGTTCTCAAACATTCCCAAATTGATGGAGCAGGGCCATGTCTACCTGCCATCAGGCGTGTGCATGTCAGGAATGGGTCGGCATGTTTCTTTCGATCAGGCCGTGGCTTGGAAAGTGCTTGCCGAGGATAGCAATGTTCACTGCCTGGCCTTCTGTTTCGTCAACTGGTCCTTTGTGTGA[0015]本发明所述OsHoxlO的氨基酸序列如下SEQIDNo3所示：[0016]MAAAVAMRGSSSDGGGYDKVSGMDSGKYVRYTPEQVEALERVYADCPKPTSSRRQQLLRECPILANIEPKQIKVWFQNRRCRDKQRKESSRLQAVNRKLTAMNKLLMEENERLQKQVSQLVHENAHMRQQLQNTPLANDTSCESNVTTPQNPLRDASNPSGLLSIAEETLTEFLSKATGTAIDWVQMPGMKPGPDSVGIVAISHGCRGVAARACGLVNLEPTKVVEILKDRPSWFRDCRNLEVFTMIPAGNGGTVELVYTQLYAPTTLVPARDFWTLRYTTTMEDGSLVVCERSLSGSGGGPSAASAQQYVRAEMLPSGYLVRPCEGGGSIVHIVDHLDLEAWSVPEVLRPLYESSRVVAQKMTTAALRHIRQIAQETSGEVVYALGRQPAVLRTFSQRLSRGFNDAISGFNDDGWSIMGGDGVEDVVIACNSTKKIRSNSNAGIAFGAPGGIICAKASMLLQSVPPAVLVRFLREHRSEWADYNIDAYLASTLKTSACSLTGLRPMRFSGSQIIIPLAHTVENEEILEVVRLEGQPLTHDEALLSRDIHLLQLCTGIDEKSVGSSFQLVFAPIDDFPDETPLISSGFRVIPLDMKTDGASSGRTLDLASSLEVGSATAQAS⑶ASADDCNLRSVLTIAFQFPYELHLQDSVAAMARQYVRSIVSAVQRVSMAISPSQTGLNAGQRIISGFPEAATLARWVCQSYHYHLGVELLSQSDOMEQLLKMLWHYQDAILCCSFKEKPVFTFANKAGLDMLETSLVALQDLTLDRIFDEPGKEALFSNIPKLMEQGHVYLPSGVCMSGMGRHVSFDQAVAWKVLAEDSNVHCLAFCFVNWSFV[0017]附图说明：[0018]图IOsHoxlO的组织特异性表达分析;其中A,BOsHoxlO的实时定量PCR及半定量PCR分析;YM-幼嫩分生组织;R-幼根;YL-幼叶;MS-成熟叶鞘;S-第一节间茎;Pl-13cm幼穗；P2_4cm[0019]幼穗;P3-开花前期幼穗；[0020]图2OsHoxlO的亚细胞定位;其中A，B，C，D，E，F为OsHoxlO和GFP融合表达载体，箭头所示为气孔;G，H，I为空载体对照；[0021]图3过表达转基因植株的表型；其中A:TO代过表达转基因植株PCR检测，1-17:分别代表TO代过表达转基因植株;CK:ddH20;P:过表达载体质粒;WT:野生型中花11;B:过表达转基因植株的表型;C:过表达转基因植株叶片的表型;WT为野生型，OsHoxIO-OV为过表达转基因植株;D:转基因植株的Realtime-PCR分析，#1、#2分别是过表达植株的两个株系;WT野生型；[0022]图4激素和干旱胁迫对Osifojd0表达的影响；其中A，B，C，D分别为ACC，JA，ABA，NAA四种激素处理后OsHoxlO的表达，用清水处理为对照WT;E为干旱胁迫处理条件下OsHoxlO的表达，以正常灌水为对照WT。具体实施方式[0023]下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步的详细说明。以下各实施例仅仅是用于说明而不是限制本发明。需要特别说明的是实施例中所用到的试剂均由市售，OsHoxlO基因序列由RT-PCR扩增获得并克隆到载体pUBI1460中。[0024]其中所用到的名词解释及来源：[0026]实施例I[0027]1材料与方法[0028]1·1材料[0029]本研究以梗稻品种中花11OryzasativaL.ssp.japonicacv.Zhonghua11及其转基因植株通过转基因获得的）为实验材料。所有材料种植于天津市农科院试验田和海南陵水南繁基地，田间保持常规管理。[0030]1.2过表达载体构建及水稻遗传转化[0031]总RNA从30天大小的水稻幼苗中提取，反转录后，以cDNA为模板扩增OsifodO的全长0RF，所用引物为F:S'-TACggtaccATTTGGCTTTGGCGAGGTAG-3'和OsfojdOR:TACgagctcTGGGATGGTCACACAAAGGA-3'小写字母为与载体中相应的酶切位点。将扩增的片段酶切回收后，连入PUBI1460空载体中，获得重组载体pUBI1460-OsHoxlO,通过酶切鉴定及测序确认后转入农杆菌中，用农杆菌介导的遗传转化法导入野生型中花11中，获得过表达转基因植株。[0032]1·3Realtime-PCR分析[0033]收集水稻新鲜的幼根、幼嫩叶片、茎顶端分生组织、成熟叶鞘及4〜13cm长的幼穗，用Ttizol试剂提取这些组织器官的总RNA。用DNaseI去除基因组DNA污染后进行反转录，得到cDNA作为PCR反应的模板。[0034]所用的引物为〇sHoxl〇-F2:5CCATAGAGCTCATGGTG[0035]CATCCTCTGGTAG-3'和0sHoxl0-R2:S'-CGGCACTAGTAATGGTAGCTCTGGCAAA[0036]C-3、以Osiciid作为内参进行相对定量，引物为ActinF:5'-GACTCTGGTGATGGTGT[0037]CAGC-3'和ActinR:S'-GGCTGGAAGAGGACCTCAGG-S^Real-timePCR反应按照SYBRGreenPCRmastermixVazyme,南京）试剂盒说明操作，在MyiQTM2TwoColorReal-TimePCRDetectionSystemBio-Rad,美国）PCR仪上进行扩增反应，并用2-ΛΛCt方法进行相对定量分析，每个反应重复3次。[0038]1.4OsHoxIO亚细胞定位[0039]总RNA从30天大小的水稻幼苗中提取，反转录后，以cDNA为模板扩增OsifodO的全长ORF去除终止密码子），所用引物为GFP-ifojd0-F:5'-TCAgagctcATTTGGCTTT[0040]GGCGAGGTAG-3'和GW3-Zfojd0-R:5'-TACgtcgacCACAAAGGACCAGTTGACGA-3'将扩增得到的目的片段经酶切回收后与空载体PCAMBIA35S::GFP进行连接，使OsifodO与G仲融合，测序鉴定正确后，分别将含有融合载体PCAMBIA35S::OsHoxlO-GFP和空载体转入农杆菌后注射进烟草OVicoiianaiabacuΏ叶片，室温下正常培养3天后，在激光共聚焦显微镜下观察结果。[0041]1.5植物激素及干旱胁迫处理[0042]分别用0.ImM的ACC、ABA和JA及ΙμΜNAA处理40天大小的野生型水稻幼苗，以用水处理的水稻幼苗做为对照，然后在规定的时间点收集叶片提取总RNA，反转录后进行RealtimePCR分析。对干旱胁迫处理，水稻幼苗生长于撤去自由流动的水的周转箱中，在处理后0、2、3、4、5、7天取样，用正常灌水条件下的幼苗做对照。[0043]2结果与分析[0044]2.1OsHoxIO的表达特性分析[0045]为了研究OsHoxlO在水稻不同组织中的表达情况，我们分别提取了野生型水稻不同组织器官的总RNA，用Realtime-PCR的方法检测OsHoxIO的表达情况，结果表明OsHoxIO在不同组织器官中均有表达，在根、茎、叶及叶鞘中表达较低，在茎顶端分生组织和幼穗中表达量较高（图1。说明OsHoxlO在分裂旺盛的部位有较高表达。[0046]2.2OsHoxlO的亚细胞定位[0047]为了进一步明确OsHoxlO的表达模式，我们构建了目的基因与GFP融合的表达载体，对目的蛋白进行亚细胞定位，以确定OsHoxlO转录因子在细胞中存在或发挥作用的位置。分别将含有融合表达载体和空质粒载体在烟草中进行瞬时表达，结果显示，pOsfodO-GFP融合表达载体在气孔细胞中有强烈的定位信号（图2A，B，C;H，I中箭头所示）。同时在周边也有强烈的绿色荧光信号，在成熟的植物表皮细胞中，由于液泡的存在，细胞质主要存在于细胞的周边，因此OsHoxlO可能定位于细胞质中，也可能是细胞质膜上（图2A，B，C;H，I。而空载体对照中，整个细胞中（如细胞膜、细胞核、细胞质都能检测到强烈的荧光，没有特异性定位图2E，F，G。[0048]2.3OsifojdO过量表达分析及转基因植株的表型分析[0049]为了揭示OsHoxlO在水稻生长发育中的功能，我们构建了一个OsifodO的过表达载体，并通过土壤农杆菌介导的遗传转化法，将过表达载体导入野生型水稻的愈伤组织中，再经过分化获得转基因幼苗。最终得到To代过表达转基因植株73株，共7个株系。我们用载体中特异的潮霉素基因引物，对To代植株的基因组DNA进行PCR检测，结果表明过表达转基因植株中有51株5个株系为转基因阳性，阳性率约为70%。（图3A。种植5个To代转基因阳性独立株系及对照，获得Tl代植株，观察田间表型发现过表达植株的分蘖数明显增多，叶片皱缩（图3B，C。我们提取了过表达转基因植株及对照的总RNA，进行目的基因OsifodO的表达分析，结果表明过表达转基因植株中OsifodO的表达量有所升高（图3D，表明OsifodO过量表达能影响水稻的株型建成。[0050]2.4植物激素及干旱胁迫处理对OsifojdO表达的影响[0051]已知的研究结果表明，HD-Zip家族转录因子可能涉及激素信号通路及环境胁迫，据此我们重点研究了ACC乙烯前体）、ABA、JA和NAA四种植物激素对Osifod0的表达影响，分别用ACC、ABA、JA和NAA四种激素处理同一时期的野生型水稻，取样用Realtime-PCR分析OsifodO的表达，结果表明四种激素处理后，OsifodO的表达量较野生型相比都有所升高（图4A，B，C，D，ACC处理2小时后，Osifod0的表达量达到峰值，之后又下降；JA处理12小时后，Osifod0的表达量是对照的3倍;ABA处理4小时后，Osifod0的表达量达到峰值;NAA处理3小时后，OsifodO的表达量最高，之后有所下降。表明ACC、ABA、JA和NAA处理诱导了目的基因的表达。另外，由于目的基因在叶片气孔中有强烈的定位，我们分析了干旱胁迫处理下OsfoJdO的表达，结果表明处理的前三天对OsfoJdO的表达没有明显影响，处理4天之后，表达量明显上升，表明干旱胁迫诱导了OsifodO的表达（图4E。因此，我们推测OsHoxlO可能与外界不良环境刺激及激素信号有关。

权利要求：l.HD-ZipIII家族成员OsHoxlO基因在增加水稻分蘖数方面的应用；所述的OsHoxlO基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示，OsHoxlO编码一个839个氨基酸的蛋白质序列为SEQIDNo3所示。

百度查询： 天津师范大学 OsHox10基因在水稻株型建成控制叶片形态方面的应用

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