申请/专利权人：西伦蒂斯私人股份公司

申请日：2014-10-21

公开（公告）日：2017-09-29

公开（公告）号：CN107223154A

主分类号：C12N15/113(2010.01)I

分类号：C12N15/113(2010.01)I;A61K31/7105(2006.01)I;A61P27/02(2006.01)I

优先权：["2013.10.22 EP 13382415.1"]

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2020.12.04#发明专利申请公布后的视为撤回;2017.10.27#实质审查的生效;2017.09.29#公开

摘要：本发明涉及siRNA分子及其在用于抑制ORAI1基因表达的方法和药物组合物中的应用。本发明还涉及所述siRNAs分子在治疗和或预防以增加的ORAI1基因表达和或活性为特征的眼病中的应用，优选地，所述眼病是结膜炎和或眼睛变态反应，诸如季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎。

主权项：用于治疗和或预防以增加的ORAI1表达和或活性为特征的眼病的siRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQ ID NO.1–SEQ ID NO.111组成的组的至少一种序列。

全文数据：SiRNA及其在用于抑制ORA11基因表达的方法和组合物中的应用发明领域[0001]本发明涉及这样的领域:SiRNA产品及其在用于治疗和或预防眼病的方法和组合物中的用途，所述方法和组合物更具体地用于治疗和或预防诸如结膜炎和或眼睛变态反应的眼病，所述眼病与高水平的ORAIl表达和或活性相关。[0002]发明背景[0003]RNA干扰RNAi是存在于大多数真核细胞中的天然存在的转录后调控机制，其使用小双链RNAdsRNA分子以指引依赖于同源性的基因沉默。Fire和MelIo在蠕虫线虫C.elegans中的该发现{Fire，1998}获得了2006年的诺贝尔奖。在对其首次描述后不久，也显示RNAi发生在哺乳动物细胞中，不是通过长的dsRNAs而是通过21个核苷酸长的双链小干扰RNAsiRNAs进行{Elbashir，2001}〇[0004]据信RNA干扰的过程是在进化上保守的细胞防御机制，用于防止外源基因的表达，并且为不同门（phyla和区系（flora所共有，其中它被称为转录后基因沉默。自从发现RNAi机制，已经进行了大量研究，用于发现能够选择性地改变基因表达的新的化合物，其通过处理这样的靶标而作为治疗人类疾病的新途径，所述靶标是利用涉及小分子或蛋白质的常规药物方法“不能用药”的。[0005]根据现有知识，RNAi的机制始于由称为切酶Dicer的RNA酶III样蛋白质处理长的双链RNAs之时。蛋白质切酶通常包含N端RNA解旋酶结构域，结合RNA的所谓PiwiArgonauteZwi11ePAZ结构域，两个RNA酶III结构域和双链RNA结合结构域（dsRBD{Collins，2005}，并且它的活性导致长的双链RNAs被加工为21-24个核苷酸的双链siRNAs，该双链siRNAs具有2个碱基的3’突出端和5’磷酸和3’羟基。所得的siRNA双链体然后结合到称为RNA诱导的沉默复合物RISC的效应物复合物中，其中在双链siRNA分子通过RNA解旋酶活性的三磷酸腺苷ATP依赖性解旋时{Nykanen，2001}，siRNA的反义或导引链指导RISC识别并切割目标mRNA序列{Elbashir，2001}。导致mRNA降解的RISC的催化活性由核酸内切酶Argonaute2AG02介导{Liu，2004;Song，2004}DAG02属于高度保守的Argonaute蛋白质家族。Argonaute蛋白质是〜IOOKDa的高碱性蛋白质，其包含两个共同的结构域，S卩PIWI和PAZ结构域{Cerutti，2000：KPIWI结构域对于与切酶的相互作用是关键的，并且包含负责切害JmRNAs的核酸酶活性{Song，2004：KAG02使用siRNA双链体中的一条链作为指导去找到含互补序列的信使RNAs并在相对于指导链的5’端的第10和第11个碱基之间切割磷酸二酯骨架{Elbashir，2001}AISC活化期间的一个重要步骤是由AG02切割正义或信使链，将此链从复合物中去除{Rand，2005}。分析siRNA指导链和PIWI结构域之间相互作用的晶体学研究表明仅第2至第8个核苷酸构成指导RISC识别目标mRNA的“种子序列（seedsequence”，并且此序列中单个核苷酸的错匹配可以显著影响所述分子的沉默能力{Ma，2005;D〇ench2004;Lewis，2003}。一旦mRNA已经被切割，由于片段中不受保护的RNA末端的出现，mRNA被细胞内的核酸酶进一步切割和降解，并且将不再被翻译为蛋白质{〇rban，2005}，同时RISC将再循环用于随后的若干轮{Hutvagner，2002}。这构成了导致特定mRNA分子及相应的蛋白质的选择性减少的催化过程。可能利用基因沉默的这种天然机制从而通过直接将siRNA效应物递送到细胞或组织中来调控任何所选的基因，在所述细胞或组织中它们将活化RISC并且产生被靶向的mRNA的有效且特异性的沉默。RNAi已经用于生物医学研究，诸如HIV、病毒性肝炎、心血管病和脑血管病、代谢病、神经变性病症和癌症的治疗{AngajiSA等2010}。[0006]已经发表了许多研究，其描述了为获得最大有效性siRNA应当具有的理想特征，BP，有关长度、结构、化学组成和序列。siRNA设计的初始参数由Tuschl及同事在W00244321中阐述，但是自此之后已经发表了许多后续研究、算法和或改进。随着机制详细信息的出现，siRNA选择方法已经变得更加精细，除此之外，对现有和新的数据进一步分析可以提供关于进一步精细这些方法的另外的了解{WaltonSP等2010}。备选地，一些最近的研究报道了新型RNAi-引发结构的设计与分析与经典的19+2siRNA结构不同，并且其在突出端、长度或对称性方面不符合经典siRNA的关键特征，这讨论了RNAi机制在哺乳动物细胞中的灵活性{ChangCI等2011}〇[0007]此外，已经投入了大量努力来增强SiRNA的稳定性，原因在于，考虑到RNA酶在生物流体中的普遍存在的性质，这被认为是基于siRNA的治疗的主要障碍之一。siRNA分子的另一个固有的问题是其免疫原性，由此已发现siRNAs诱导先天性免疫系统的非特异性的激活。非目标基因（mRNAs的敲减是siRNA-介导的基因沉默的公知的副作用。其由于siRNA与不同于目的靶标的mRNAs之间的部分互补性引起，并且由与任一siRNA链具有序列互补性的基因引起脱靶效应OTEs。用于稳定性增强和OTE减少所遵循的主要策略之一是使用修饰的核苷酸，如2’-0-甲基核苷酸，2氨基核苷酸，或含有2’-0或4’-C亚甲基键的核苷酸。此夕卜，已经描述了对连接相邻的核苷酸的核糖核苷酸骨架的修饰，即，主要通过引入硫代磷酸酯修饰的核苷酸进行。似乎增强的稳定性和或免疫原性降低通常与功效成反比{Parrish，2000}，并且仅有特定数量的、位置和或修饰的核苷酸的组合才能导致稳定的且无免疫原性的沉默化合物。由于这是基于siRNA的治疗的主要障碍，所以已经公开了不同的研究，其描述了表现出良好的结果的特定的修饰模式，这些的实例包括EP1527176,W02008050329，W02008104978或W02009044392,尽管在参考文献中可以找到许多更多实例{SanghviYS.2011;Deleavey等2012}〇[0008]变应性疾病的特征在于人免疫系统对食用、吸入肺中、注射或接触到的外源蛋白质物质（“变应原”）的过度反应。变态反应allergy具有遗传成分。如果父母亲中仅有一方具有任意类型的变态反应，那么，每个孩子将具有变态反应的机会是13。如果父母双方都具有变态反应，那么他们的孩子具有变态反应的可能性要大得多（710。对于变态反应无法治愈;然而，可以用正确的预防和治疗来管理它们。[0009]全世界大约有30%的人患有变态反应症状，并且他们中有40-80%具有眼部症状{KeyB.2001}。影响眼睛的变应性疾病或眼睛变态反应组成异质heterogenic疾病组，其具有非常广谱的临床表现。眼睛变态反应通常在结膜覆盖眼睛的膜和眼睑的内层与变应原反应时发生。眼睛变态反应可以独立发生或与其他变态反应症状诸如鼻炎或哮喘联合发生。[0010]基本和临床研究已经提供了对细胞、介质和眼睛变态反应中发生的免疫学事件的更好的理解。眼睛，特别是结膜，具有相对多数量的肥大细胞。当存在变应原时，它们可以以在这些肥大细胞表面上的FceRI受体结合免疫球蛋白IgE，并且引发它们的激活和变态反应介质的释放称为脱粒化degranulation的过程）。脱粒化将肥大细胞成分包括组胺，前列腺素，类胰蛋白酶和白三烯释放到肥大细胞外的环境中。通过多种机制，这些成分产生眼睛变态反应的迹象和症状。变应性炎症的肥大细胞的激活通常称为眼睛变态反应的急性期反应或早期。急性期反应可以进展为晚期反应，其特征在于将炎症细胞招募到变应性炎症部位，例如，作为进入结膜的嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞流入。[0011]眼睛变态反应代表变态反应学家和眼科医师遇到的最常见的病况之一。眼睛变态反应通常与下述症状和迹象相关:结膜炎conjunctivitis，眼睑炎blepharitis，睑缘结膜炎blepharoconjunctivitis或角膜结膜炎keratoconjunctivitis。眼睛变红，发痒，并且存在流泪和轻微的分泌物（slightdischarge。严重的病例还可能表现为眼睛烧灼感、疼痛和畏光。[0012]影响眼睛的变应性疾病包括轻微形式，诸如季节性变应性结膜炎（seasonalallergicconjunctivitis，SAC和常年性变应性结膜炎（perennialallergicconjunctivitis，PAC;以及更严重的表现，诸如春季角膜结膜炎（vernalkeratoconjunctivitis，VKC;特应性角膜结膜炎atopickeratoconjunctivitis，AKC和巨乳头状结膜炎giantpapillaryconjunctivitis，GPC。后者可以与诸如角膜损伤的并发症相关，并且可以引起视力丧失。SAC和PAC是常见的IgE-肥大细胞介导的针对外源变应原的超敏性反应;而AKC和VKC特征在于涉及数种免疫细胞类型的慢性炎症。SAC和PAC变应原在抗原呈递细胞APCs的帮助下引发Th2_主导性免疫应答Th2_predominantimmuneresponse，其诱导B细胞释放IgE。变态反应应答的激活通常涉及肥大细胞的浸润和脱粒化。[0013]SAC是最常见的眼睛变应性疾病，通常由如空气传播的花粉、粉尘和动物毛肩引起。迹象和症状通常在春季和夏季发生，并且通常在冬季月份减轻。结膜发痒、发红和肿胀是最特征性的症状，还有流泪、烧灼感和畏光。在大部分情形中，SAC不严重。然而，由于其可以影响患者的生活质量，并且可能具有严重的社会经济影响，其对于患者其可能是非常烦扰的IKari0·和SaariKM2010}。[0014]PAC是第二常见的眼睛变应性疾病，通常由动物和螨虫引起。症状和迹象与SAC在很大程度是相同的，不同在于患者变态反应的特定变应原和PAC可以一年到头地发生，暴露于常年性的变应原。PAC影响所有年龄组，但是主要是两种性别的年轻人和中年人。另外，PAC通常与干眼综合征联系在一起。[0015]SAC和PAC是最常见形式的眼睛变态反应。估计值变化，但是据说这些类型的变态反应影响总人口的至少15-20%AAC和PAC通常被漏诊，并且因此未被治疗。在SAC和PAC中，变应原诱导的IgE局部释放以Ca2+依赖性机制促进肥大细胞的脱粒化。IgE-激活的肥大细胞释放预先形成的炎性介质，诸如组胺和白三烯4,它们是变应性反应的最先的介质。这些介质吸引浸润到区域的嗜酸性粒细胞，扩大了变应性反应。[0016]VKC是相对罕见的眼睛表面的慢性变应性炎症，其主要影响儿童和青少年。主要的症状是发痒、发红、肿胀、流泪和畏光。最有特征性的迹象是上睑板部结膜中的巨乳头。[0017]AKC是眼睛表面和眼睑的双侧慢性炎症疾病。最有特征的迹象是眼睑上的湿疹性损伤，其是发痒的。对于AKC患者常见的是在幼小的年纪进行白内障手术{KariOjPSaariKM2010}〇[0018]GPC是以上睑板部结膜的乳头状肥大为特征的炎性疾病。GPC由惰性物质而不是变应原引起。当去除这些刺激性的刺激物时，结膜乳头变化消退。在隐形眼镜表面上的蛋白沉积可能变成变应性的，并且刺激IgE产生{LaRosaM.等2013}。[0019]目前用于眼睛变态反应的治疗包括非药理学和药理学策略。避免抗原是用于所有类型的眼睛变态反应的主要行为修正。人工泪液替代品提供屏障功能，并且帮助改善在结膜粘膜水平上的第一线防御。当非药理学策略不能提供充分的症状缓解时，可以使用药理学治疗。[0020]管理眼睛变态反应的主要依靠包括使用抗变态反应治疗剂，诸如抗组胺，双重作用或联合治疗以及肥大细胞稳定剂。局部用的抗组胺诸如依美斯汀Emedastine和左卡巴斯汀Levocabastine竞争性且可逆地阻断组胺受体，并且缓解发痒和发红，但是仅是短时间的。抗组胺不影响其他的促炎症介质，它们保持被抑制。有限的作用持续时间使得必须频繁给药，并且局部用抗组胺对眼睛可能是刺激性的，尤其是长期使用时。[0021]使用解充血药诸如轻甲卩坐啉oxymetazoline，四氢卩坐啉（tetrahydrozoline和萘甲卩坐啉naphazonline联合抗组胺的联合治疗作为血管收缩药起作用，但是已知在滴注时是刺痛或烧灼的。其他不利事件包括瞳孔扩大和反弹的充血，使得这些联合治疗更适合短期缓解。另外，这些药物不被推荐用于患有狭角性青光眼narrow-angleglaucoma的患者。肥大细胞稳定剂诸如色甘酸盐cromoglycate，洛度沙胺（Iodoxamide，奈多罗米nedocromil具有尚不清楚的作用机制。它们不缓解现有的症状，并且仅可以基于预防基础使用，以预防肥大细胞在后续暴露于变应原时脱粒化。它们需要一个装载期（loadingperiod，在该期间，它们必须在抗原暴露之前使用{LaRosaΜ.等2013}。[0022]当上文提及的抗变态反应药物不允许对变应性炎症过程的充分控制时，使用抗炎症药剂。皮质类固醇是用于眼睛变态反应的更严重的变型的最有效的药剂之一ILaRosaΜ.等2013}。然而，留体药物可能具有威胁患者的整体健康的副作用。长期施用皮质类固醇可能通过抑制肠1丐吸收和抑制骨形成而导致药物诱导的骨质疏松症osteoporosis。由于这些药物对身体代谢过程的影响，长期施用皮质类固醇的其他不利副作用包括高血压hypertension，高血糖hyperglycemia，高脂血hyperIipidemia增加水平的甘油三酯）和高胆固醇血症hypercholesterolemia增加水平的胆固醇）。还已知某些皮质类固醇具有比该种类的其他化合物更大的升高眼内压ΓΙ0Ρ"的潜力。例如，已知泼尼松龙prednisolone其是一种非常有效的眼睛抗炎剂具有比氟米龙fIuorometholone其具有中等眼睛抗炎活性更大的升高IOP的趋势。还已知与皮质类固醇的局部眼科应用相关的IOP升高的危险随时间增加。换言之，这些药剂的长期使用（即，长时间的）增加显著的IOP升高的危险。因此，皮质类固醇可能不适合用于长期的眼睛变态反应治疗。另外，由于增加的发展白内障和青光眼的危险，长期使用皮质类固醇是禁忌的IOnoSJ，和AbelsonMB，2005}〇[0023]变态反应的免疫疗法可用于减少针对变应原的反应，但是其在变应性结膜炎中的作用还未得到证实。这种治疗的主要目的是诱导针对特定变应原的临床耐受性。该疗法以递增的剂量皮下施用，以保持低于临床反应的阈值。认为舌下免疫疗法SLIT是皮下变态反应免疫疗法的备选方案，并且在舌下口服，但是使用SLIT的长期结果还没有获得。使用这种形式的疗法的大部分试验是用于变应性鼻炎allergicrhinitis。通常，针对变应原施用的免疫反应不能预测疗法的功效，并且疗法本身可以产生系统性反应，其发生率和严重性取决于施用的变应原的类型而不同{LaRosaM.等2013}。[0024]另外，大部分较新的眼科抗变态反应药剂具有有限的作用持续时间，并且需要每天两次给药。由于具有更久的作用持续时间的局部用制剂可以每天滴注一次，因此，其将是有利的。因此，需要新的疗法，所述疗法可以在诸如功效和作用持续时间方面提供益处，同时提供与传统眼科抗变态反应剂相似的安全模式。[0025]已经指出基于RNA干扰的疗法具有满足变态反应治疗中未满足的需求的潜力{Popescu?0.2005}。已经证明，在用变应原致敏的小鼠中系统施用^408丨1«^能够通过抑制树突细胞和B细胞功能并且产生调控T细胞而减轻鼻变态反应症状{SuzukiM.等2009}。另外，通过使用⑶40-沉默的和变应原刺激的allergen-pulsed树突细胞还开发了用于变应性鼻炎的基于siRNA的变应原特异性疗法{SuzukiM等2010}。[0026]细胞中细胞内游离钙Ca2+浓度的变化调节多种生物学细胞功能。Ca2+信号通过内质网（ER的受控的Ca2+释放产生，内质网是细胞中主要的钙储库。钙从ER的释放激活质膜上储库-操纵的Ca2+S0C通道，引发胞外钙流入细胞质的储库-操纵的Ca2+进入S0CE。最近的研究强调了该Ca2+进入机制在多种病理生理学过程（包括变态反应）中的重要性{1^坪1116丨61¥等2013}〇[0027]SOCE响应ERCa2+池的消耗而激活。SOCE的激活诱导Ca2+从胞外区室进入，并且这受储库-操纵的Ca2+释放-激活的Ca2+CRAC通道介导{HothM.等1992}。[0028]CRAC通道由称为SIlM间质相互作用分子）的钙感应蛋白和命名为ORAI的孔形成亚基构成。哺乳动物细胞具有三个ORAI同种型:ORAII，0RAI2和0RAI3;尽管0RAI2和0RAI3实现与ORAIl相同的作用，但是由这些蛋白产生的Ca2+流比由ORAIl产生的小约两倍至三倍{SmythJ.T.等2006}。[0029]ORAIl是广泛表达的33kDa的质膜蛋白，具有4个跨膜结构域，该蛋白在钙储库消耗时被钙感应器间质相互作用分子ISHMl激活，并且诱导胞外的钙经由CRAC通道流入细胞质。ORAI1也称为CRAC介质I，CRACMl，ORATl，跨膜蛋白142A，TMEM142A，或CRAC通道蛋白1。ORAI1已被定义为CRAC通道的关键亚基{WangY.等2012}。[0030]越来越多的证据证明，变应性反应中免疫细胞的短期和长期激活是由Ca2+从胞外区室向免疫细胞的流动介导的。短期反应包括肥大细胞的脱粒化和效应溶细胞性T细胞的激活。事实上，缺少STIMl或ORAIl的肥大细胞表现出相当大的脱粒化缺陷{VigM.等2008;BabaY.等2008}。长期反应包括对控制B和T细胞增殖和分化的基因表达的调控{ParekhA.B.等2005}。[0031]还提示ORAIl在小鼠肥大细胞效应子功能中是至关重要的。来源于ORAIl-缺失小鼠的肥大细胞表现出非常不足的脱粒化，并且诱导IgE介导的体内被动过敏性反应也依赖于ORAIlJVigM,等2008}。[0032]已经在变应性鼻炎中研究通过RNAi敲减ORAI1。施用至IjOVA-致敏的小鼠鼻孔中的编码针对ORAIl的shRNA短发夹RNA的重组慢病毒载体减轻变应性鼻炎症状打喷嚏次数和擦鼻子nasalrubbings次数）{Wang等2012}。鼻炎由因堵塞或充血导致的鼻刺激性或炎症产生。变应性鼻炎是与数种类型的免疫细胞的高反应性相关的上呼吸道变应性炎症{Wang等2012}。然而，并不是所有的鼻炎病例都是由变态反应引起。鼻炎也由对化学暴露的反应而产生，包括吸烟、温度变化、感染和其他因素。[0033]另一个研究用siRNA敲减ORAIl，以减少组胺介导的C0X-2表达和NFkB激活，这表明ORAI-介导的NFkB激活是负责传递组胺信号的重要信号传导途径，所述组胺信号在变应性应答中引发炎性反应{HuangWC等2011}。[0034]因此，可能的是，眼睛变态反应中炎性反应中的一个重要部分由ORAIl激活介导。[0035]存在关于涉及敲减ORAIl用来治疗变态反应的siRNA的专利文件。W02010099401LelandStanfordJuniorUniversity信托委员会描述了调节细胞内CRAC通道活性的方法，其中CRAC通道与氨基酸残基STIMl结构域接触，所述SIlMl结构域结合ORAIl并且打开CRAC通道。其中列出了可治疗的病况:免疫系统的变态反应或超敏性，包括延迟类型的超敏性和哮喘。在说明书中，其表明，siRNA可能用于破坏内源基因的表达，从而确定该内源基因是否具有调节STIM与ORAI蛋白之间的相互作用的作用。[0036]W02007121186TheQueersMedicalCenter女王医学中心））描述了在人胚肾细胞HEK293中siRNA-介导的人CRACMlORAIl沉默。其还表明，通过与CRACMlORAIl蛋白相互作用或破坏CRACMl0RAI1表达而调节CRAC通道活性的试剂可以用于调节变态反应。[0037]W02009095719ISISINNOVATIONUMITED描述了用于治疗与肥大细胞激活相关的病症的方法、应用和产品，包括抑制CRACMlORAIl蛋白的药剂其可以是siRNAs和抑制肥大细胞的白三烯激活的药剂的组合，用于治疗变应性病症，特别是变应性鼻炎。[0038]US20110112058IncozenTherapeuticsPvt.Ltd.描述了用于鉴定用于治疗肺癌的候选药剂的方法，所述药剂优选地抑制CRACMlORAI1。该文件还描述了使用siRNA来调节CRACSTIM途径。其还表明CRAC通道调节剂已被认为可用于治疗、预防和或减轻与钙释放-激活的钙通道相关的疾病或病症，包括变应性鼻炎和变应性结膜炎。[0039]US20120264231HoganPatrick等）描述了用于鉴定用于治疗与钙信号传导的失调相关的病况和疾病的试剂的方法和系统，所述试剂可以是siRNA，其调节通过ORAI通道的钙流和或调节经过ORAI通道的胞内钙，所述病况和疾病包括变应性鼻炎或变应性结膜炎。[0040]眼睛变态反应中，炎性反应的一个重要部分由0RAI1调节，不仅是炎性反应的关键决定因素，而且其也与细胞增殖和细胞迀移相关。在视网膜色素上皮（RPE细胞中通过siRNA抑制0RAI1表明0RAI1参与表皮生长因子EGF-介导的细胞生长。该研究猜想0RAI1可能是旨在治疗EGF-相关的病症（诸如增生性玻璃体视网膜病变（proIiferativevitreoretinopathy，PVR的药物的潜在治疗革E标{Yang等2013}C3PVR是作为孔源性视网膜脱离rhegmatogenousretinaldetachment的并发症发展的一种疾病，在该过程中，来自玻璃体液的流体进入视网膜裂孔。还没有充分理解形成视网膜裂孔或泪液的机制。流体在视网膜下间隙中的积聚和视网膜上玻璃体的牵引力导致孔源性视网膜脱离。在该过程中，视网膜细胞层与玻璃体细胞因子接触，所述玻璃体细胞因子引发RPE增生的能力，并且迀移正在进行的上皮-间质转换EMT，发展迀移出来进入玻璃体的能力。在该过程中，失去RPE细胞层-神经视网膜粘附和RPE-ECM胞外机制粘附。在它们迀移时，RPE细胞放弃纤维膜，并且这些膜收缩且在视网膜上牵拉。所有这些最终导致在原发性视网膜脱离手术后的继发性视网膜脱离。[0041]发明概述[0042]本发明提供用于减少ORAIl表达并且因此减轻眼睛变态反应中的眼睛炎症的改善的产品。相对于传统抗变态反应治疗剂和变态反应免疫治疗药，使用SiRNA产品治疗眼睛变态反应的优点在于基于SiRNA的治疗将具有持续更久的效果。该结果是由于这样的事实导致的：一旦不再存在效应分子，则细胞将必须从头合成新的受体;而传统的治疗将使得细胞膜上的受体水平不受影响。[0043]在世界范围内，眼睛变态反应似乎增多。特别是在工业化国家中，普遍认为环境污染是变应性个体增加的敏感性的主要贡献因素。除了恶化的排放污染，研究还指出空气传播的变态反应原的全球增加。还有另一个考虑是较贫穷国家的居民不太可能为眼睛变态反应寻求治疗，这是可能使不发达国家中报告的疾病发病率人为保持较低的因素。[0044]美国哮喘和变态反应基金会（AsthmaandAllergyFoundationinAmerica，AAFA指出美国每年的变态反应花费估计为将近145亿美元。他们估计5000万美国人患有所有类型的变态反应5名美国人中有1人），包括室内室外、食品和药物、胶乳、昆虫、皮肤和眼睛变态反应。自从20世纪八十年代早期以来，美国变态反应流行性整体上增加，贯穿了所有年龄、性别和种族。[0045]尽管具有地理独特性，但是来自全世界的医师发现了他们用于选择适当的治疗疗程的标准的共同基础。按照来自数个国家的专家说法，这些标准包括功效、安全性和给药的便利性以及对患者施用的舒适性。因此，随着全世界抱怨各种眼睛变态反应症状的患者人数的增加，发现最佳的治疗每天都是更加复杂且更加有趣的。[0046]附图描述[0047]图1:显示选择作为本发明的siRNAs的靶序列的靶基因序列ORAIl的短片段。[0048]图2:显示用于靶向本发明包括的ORAIl的本发明的siRNA分子的寡核苷酸序列。该附图中提供的SEQIDNOs是指有义5’-3’）链;典型地，siRNAs作为dsRNAs施用，因此将包括有义链及其互补反义链二者。SEQIDNO.112-SEQIDNO.222是分别靶向SEQIDNO.1-SEQIDNO.111的siRNAs。通常，siRNA包含有义链和反义链，并且还可以包含3’二核苷酸突出端例如，dTdT。然而，这不是必需的。[0049]图3:修饰的靶向0RAI1的siRNAs。给出的SEQIDNOs是指该修饰的ORAIlsiRNAs的有义5’_3’）链。[0050]图4:在不同细胞系（人A204，鼠C2C12和鼠J744A，1中转染SEQIDN0.112后的体夕卜0RAI1表达水平。[0051]图5:在鼠C2C12细胞系中转染靶向0RAI1的siRNAs后的体外0RAI1表达水平。[0052]图6:在不同细胞系（人A204和鼠C2C12中转染SEQIDNO.112后，不同细胞系的体外毒性水平。[0053]图7:在人A204细胞中转染SEQIDNO.112及其修饰的对应体SEQIDNO.223，SEQIDNO.224,SEQIDNO.225,SEQIDNO.226,SEQIDNO.227,SEQIDNO.228和SEQIDNO.229后的体外人ORAI1表达水平。[0054]图8:在鼠C2C12细胞中转染SEQIDNO.112及其修饰的对应体SEQIDNO.223,SEQIDNO.224,SEQIDNO.225,SEQIDNO.226,SEQIDNO.227,SEQIDNO.228和SEQIDNO.229后的体外鼠ORAI1表达水平。[0055]图9:显示人细胞中SEQIDN0.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8的剂量响应。用增加剂量（O.OOl-lOONm的SEQIDN0.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8转染人A204细胞并且定量siRNA作用机制的％0RAI1基因表达结果。[0056]图10:显示在鼠细胞中SEQIDNO·112SYL116011和SEQIDNO·227SYL116011v8的剂量响应。用增加剂量（O.OOl-lOONm的SEQIDN0.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8转染鼠C2C12细胞并且定量siRNA作用机制的％0RAI1基因表达结果。[0057]图11:显示人细胞中转染SEQIDNO.112SYL116011和SEQIDΝ0·227SYL116011v8后的0RAI1及其旁系同源物paralogues0RAI2和0RAI3的表达。在人Α204细胞中转染SEQIDNO.112和SEQIDNO.227,并且定量siRNA作用机制的％0RAI1、0RAI2和ORAI3基因表达结果。[0058]图12:显示在鼠细胞中转染SEQIDNO.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8后的0RAI1及其旁系同源物0RAI2和0RAI3的表达。在鼠C2C12细胞中转染SEQIDN0·112和SEQIDN0·227，并且定量siRNA作用机制的％0RAIl、0RAI2和0RAI3基因表达结果。[0059]图13:显示在人细胞中转染SEQIDN0.112SYL116011后的推定的OTEs的表达。在人A204细胞中转染SEQID如.112，并且定量8丨1?祖作用机制的％01^11、]\^1^和01^]\112八基因表达结果。[0060]图14:显示在大鼠细胞系中转染SEQIDN0.112SYL116011后的0RAI1表达水平。在大鼠C6细胞中转染SEQIDNO.112,并且定量siRNA作用机制的％0RAI1基因表达结果。[0061]图15:显示在大鼠细胞系中转染SEQIDN0.112SYL116011后的0RAI1表达水平。在大鼠JTC-19细胞中转染SEQIDNO.112,并且定量siRNA作用机制的％0RAI1基因表达结果。[0062]图16:显示在人、鼠和大鼠细胞中转染SEQIDN0.112SYL116011、SEQIDN0·233SYL116011vll和SEQIDN0·235SYL116011vll后的0RAIl基因表达水平。[0063]图17:体内测定的时间表。[0064]图18:在诱导眼睛变态反应后在不同时间，小鼠整个眼睛中的ORAIImRNA水平。NA:没有变态反应。[0065]图19:在豚草-花粉诱导的变态反应小鼠模型中的TLSP和Tnfrsf9mRNA水平。mRNA水平表示为诱导变态反应之前观察到的水平的百分数。[0066]图20:指示眼睛变态反应的眼睛临床迹象。在诱导眼睛变态反应后1，3,6和24小时，观察小鼠。通过以等级0-3分级下述参数来评估临床迹象：结膜水肿和充血conjunctivalchemosisandinjection，充血hyperemia，目艮险水月中（lidedema，分泌物和流泪。数据表示为在PBS处理组诱导变态反应后1小时的临床评分的百分数，并且表示PBS处理组8只动物的平均值土s.e.m和SEQIDNO.112SYLl16011处理组15只动物的平均值±s.e.m〇[0067]图21:在豚草-花粉诱导的变态反应小鼠模型中，响应不同剂量的SEQIDNO.112SYLl16011的结膜水肿和流泪。在诱导眼睛变态反应后1，3，6和24小时观察小鼠。A结膜水肿和B流泪以等级0-3评分。数据表示为在PBS处理组诱导变态反应后1小时的评分的百分数，并且表示PBS处理组8只动物的平均值土s.e.m和SEQIDNO.112SYLl16011处理组15只动物的平均值土s.e.m。[0068]图22:在豚草-花粉诱导的变态反应小鼠模型中，睑结膜和球结膜中的肥大细胞响应不同剂量的SEQIDNO.112SYLl16011的浸润。A睑结膜中的肥大细胞的浸润表示为在处理后3小时在PBS处理的样品中观察到的肥大细胞的数目的百分数。B球结膜中的肥大细胞的浸润表示为在处理后3小时在PBS处理的样品中观察到的肥大细胞的数目的百分数。[0069]图23:在豚草-花粉诱导的变态反应小鼠模型中，睑结膜和球结膜中的嗜酸性粒细胞响应不同剂量的SEQIDNO.112SYL116011的浸润。A睑结膜中的嗜酸性粒细胞的浸润表示为在处理后24小时在PBS处理的样品中观察到的肥大细胞的数目的百分数。B球结膜中的嗜酸性粒细胞的浸润表示为在处理后24小时在PBS处理的样品中观察到的嗜酸性粒细胞的数目的百分数。[0070]图24:在豚草-花粉诱导的变态反应小鼠模型中，响应不同剂量的SEQIDNO.1125丫1^16011处理的1'1^?和〇-137表达^1'1^?的表达;8〇-1371'11打8€9的表达。[0071]图25:在变应性攻击后，在不同时间点观察到的临床迹象。通过向用PBS、SEQIDNO.227SYLl16011v8或左卡巴斯汀（Ievocabastine预处理的小鼠施用眼睛剂量的豚草花粉诱导变态反应。数据表示为每组10只动物的平均值。[0072]图26:给药后充血的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛⑧和赋形剂预防性。[0073]图27:给药后斜视的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛⑧和赋形剂预防性。[0074]图28:给药后眼睑肿胀的变化-SEQIDNO.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®和赋形剂预防性。[0075]图29:给药后分泌物的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®和赋形剂预防性。[0076]发明详述[0077]在第一方面，本发明涉及提供SiRNA分子，其作为药物用于治疗和或预防以增加的0RAI1表达和或活性为特征的眼病，其中所述分子特异性靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的序列，并且当引入到细胞中时减少ORAI1基因的表达。优选地，所述靶序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.14组成的组，更优选地，由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地，所述靶序列包含SEQIDNO.1或由SEQIDNO.1组成。[0078]例如，当siRNA分子选择性减少或抑制基因的表达时，该基因被本发明所述的SiRNA“祀向”。短语“选择性减少或抑制”用在本文中包括影响一种基因（在这种情形中，是0RAI1的表达的siRNAs。备选地，当siRNA的一条链在严格条件下与基因转录物（S卩，其mRNA杂交时，所述SiRNA靶向该基因。“在严格条件下”杂交意指在趋向于不利于杂交的标准条件下，例如，高温和或低盐含量下，与靶标mRNA区域退火。适当的流程包括0.1XSSC，68°C2小时）记述在Maniatis,T.等，MolecularCloning:ALaboratoryManual分子克隆：实验室手册），ColdSpringHarborLaboratory,1982,第387-389页中。[0079]除非另外指明，本文所引用的核酸序列以5’至3’方向书写。术语“核酸”是指DNA或RNA或其修饰的形式，其包含在DNA中存在的嘌呤或嘧啶碱基腺嘌呤“A”，胞嘧啶“C”，鸟嘌呤“G”，胸腺嘧啶“T”）或在RNA中存在的嘌呤或嘧啶碱基（腺嘌呤“A”，胞嘧啶“C”，鸟嘌呤“G”，尿嘧啶“U”）。例如，本文提供的干扰RNAs可以在3’端包含“T”碱基，即使“T”碱基在RNA中不是天然存在的。在一些情形中，这些碱基可以作为“dT”出现，以区分在核糖核苷酸链中存在的脱氧核糖核苷酸。[0080]上文定义的靶序列记述为靶DNA序列，用于定义在用于设计SiRNAs的目的的数据库中的转录变体，而要用的特定的化合物将是按原样定义的RNA序列。[0081]本领域专家可以通过公共数据库访问任意靶基因序列。例如，对应人ORAIImRNA的GenBank登记号为NM_032790GeneID:84876。对应小鼠ORAIImRNA的同源GenBank登记号为匪_175423GeneID:109305。此外，ENSEMBLMBL-EBIWellcomeTrustSangerInstitute具有下述ORAIl人和小鼠登记号：分别为ENSG00000182500和ENSMUSG00000049686。人0RAIlmRNA的公共转录物是ENST0000330079和ENST0000537188。[0082]本发明鉴定的所述优选的靶标区域包含选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列或由选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列组成。[0083]在一个优选的实施方案中，所述优选的靶标区域包含选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.14组成的组的至少一种序列或由选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.14组成的组的至少一种序列组成。[0084]在另一个优选的实施方案中，所述优选的靶标区域包含选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组的至少一种序列或由选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组的至少一种序列组成。这些序列在下述物种之间具有100%的同源性：智人Homosapiens，小家鼠（Musmusculus，家犬（Canislupusfamiliaris和褐家鼠（Rattusnorvegicus。[0085]在RNAi领域中，当体外研究证明人siRNA不能诱导动物模型基因的敲减时，合成替代化合物动物活性的类似物），从而分析该siRNA在相关动物模型中的功效。该替代物针对人siRNA的相同区域设计，由此两种siRNAs除少数核苷酸外具有相同的序列，这取决于人和兔靶基因之间的同源性。该方法已经广泛用于开发其他的寡核苷酸，特别是用于毒物学研究{KornbrustD.等.2013}。[0086]在一个更优选的实施方案中，所述优选的靶标区域包含SEQIDNO.15’-TGATGAGCCTCAACGAGCA-3，）或由其组成。[0087]因此，本发明各个方面所述的siRNA优选地将包含双链RNA分子，其反义链将包含基本上与选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列互补的RNA序列，并且其有义链将包含与所述反义链互补的RNA序列，其中两条链通过核苷酸之间的标准碱基配对而杂交。更优选地，本发明各个方面所述的siRNA优选地包含双链RNA分子，其反义链将包含基本上与选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成（并且甚至更优选地由SEQIDNO.1组成）的组的序列互补的RNA序列。[0088]在本发明的意思内，与靶标mRNA序列“基本上互补”也可以理解为与所述靶序列“基本上相同”。如本领域普通技术人员已知的，“同一性”是通过匹配序列之间的核苷酸的顺序和相同性所确定的核苷酸序列之间的序列相关性的程度。在一个实施方案中，与靶标mRNA序列具有85%,86%,87%,88%,89%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%，98%或99%互补性的siRNA的反义链被认为是基本上互补的，并且可以用于本发明。互补性百分数描述在第一核酸分子中可以与第二核酸分子中一组连续的核苷酸在沃森-克里克意义Watson-Cricksense上碱基配对的连续的核苷酸的百分数。在一个优选的实施方案中，反义siRNA链与靶标mRNA序列100%互补，并且有义链与siRNA双链部分的反义链100%互补。siRNA还可以包含未配对的突出端，例如，3’二核苷酸突出端，优选是dTdT。[0089]在一个优选的实施方案中，本发明鉴定的所述眼病是眼睛变态反应和或眼睛结膜炎。更优选地，所述眼病选自季节性变应性结膜炎，常年性变应性结膜炎，春季角膜结膜炎，特应性角膜结膜炎，巨乳头状结膜炎，干眼综合征和它们的组合。[0090]如从现有技术中已知的，已经提议了多种不同的结构来实现RNA干扰。一般地，这些双链分子在长度上约为19至约25个核苷酸，并且包括平端结构以及具有突出端的那些。已经记载突出端是有利的，并且可以存在于每条链的5’端或3’端，原因在于它们减少被RNA酶的识别并且模拟切酶的天然底物。一些作者推荐在分子的两个3’端包含突出端，而其他人认为一个突出端是足够的。其他人已经描述了使用具有特定的修饰模式的平端结构EP1527176，W02005062937，W02008104978，EP2322617，EP2348133，US20130130377,以及许多其他的）。[0091]突出端可以由1-5个核苷酸构成;典型地，突出端由二核苷酸组成。本领域中所用的经典的分子包含19个核苷酸的双链分子，其进一步包含3’二核苷酸突出端，优选地包含脱氧核苷酸，如Tuschl的最初的研究所教导的W00244321。这些突出端被认为进一步增加对核酸酶RNA酶降解的耐受性。后来，Kim等2005记述了21-mer产物含有二核苷酸突出端是装载到RISC上所必需的。此外，Bramsen等2009记述了向突出端引入可能的去稳定化修饰以进一步增加沉默效率。[0092]由此，本发明的各个方面的一个优选实施方案是指包含至少一个突出端的靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的siRNA分子。更优选地，所述siRNA分子靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成（甚至更优选地由SEQIDNO.1组成）的组的至少一种序列。当本发明涉及靶向选自SEQIDNO.I-SEQIDNO.111的至少一种序列的siRNA分子时，所述siRNA将包含与靶标相等长度且互补的反义链和与反义链相等长度且互补的有义链。反义链和有义链可以进一步包含不与另一条链或靶标互补和或在siRNA的双链部分不配对的另外的碱基。例如，SEQIDNO1是19个核苷酸的序列；siRNA可以包含关于该序列同一性部分的19bp的双链区和二核苷酸突出端。[0093]本发明各个方面的一个优选实施方案是指靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的siRNA分子，其中所述双链siRNA分子的每条链为约18至约28个或更多个例如，约18，19,20,21，22,23,24,25,26,27,或28个或更多个核苷酸长。[0094]本发明各个方面的另一个优选实施方案是指包含选自由SEQIDNO.112-SEQIDNO.229组成的组的核苷酸序列的18-28个核苷酸长或更长的siRNA分子。更优选地，所述双链siRNA分子是至少19个核苷酸长，并且选自由SEQIDNO.112-SEQIDNO.229组成的组。[0095]本发明的各个方面的另一个备选的实施方案提供平端分子。[0096]此外，本发明的优选实施方案涉及包含或由靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的19个核苷酸的双链结构组成的siRNA。更优选地，所述siRNA包含或由靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组的至少一种序列的19个核苷酸的双链结构组成，并且甚至更优选地由SEQIDNO.1组成。[0097]本发明的具体的实施方案涉及靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.Ill组成的组的至少一种序列的19个核苷酸的双链平端siRNA。更优选地，所述siRNA靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8并且甚至更优选地由SEQIDNO.1组成）的组的至少一种序列。在另一个具体的实施方案中，该化合物包含或由选自由SEQIDNO:112-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列组成。在另一个优选实施方案中，该siRNA的反义链与选自由SEQIDNO.1-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列至少80%、优选至少90%互补。[0098]在一个优选的实施方案中，该化合物包含或由选自由SEQIDNO.112-SEQIDNO.119组成的组的至少一种序列组成。[0099]在一个更优选的实施方案中，该化合物包含或由SEQIDNO.1125’-UGAUGAGCCUCAACGAGCA-3’）组成，其对应于我们命名为SYLl160011的参比化合物的有义链。[0100]此外，如称为本领域背景的部分中所述，关于siRNA分子的重要的问题是由于RNA酶的普遍存在的性质导致其在生物流体中的不稳定性。由此，为增强化合物稳定性的目的，已经记述了对核苷酸的多种不同的化学修饰的应用。[0101]siRNA分子的另一种固有的问题是其免疫原性，由此已经发现siRNAs诱导先天性免疫系统的非特异性的激活，包括某些细胞因子的上调，例如，I型和或II型干扰素以及IL-12、IL-6和或TNF-α的产生。认为这些作用的起源是siRNA对Toll样受体如TLR7、TLR8和或TLR3的激活。[0102]这些作用，即被RNA酶识别和免疫原性，二者都已经被记述为是序列依赖性的。[0103]通过减少对RNA酶的敏感性而增强化合物稳定性的一些化学修饰还能够减少后续应答的免疫识别的诱导。然而，在siRNA中插入化学修饰的核苷酸还可能导致减少的沉默功效，如在前部分中所述，并且因此必须仔细考虑。[0104]由此，在本发明的各个方面的优选的实施方案中，siRNA进一步包含至少一个具有化学修饰的核苷酸。[0105]增强稳定性并且减少免疫原性作用的优选的化学修饰包括2’-0_甲基核苷酸，2’-氟核苷酸，2氨基核苷酸，2脱氧核苷酸，或含有2’-0或4’-C亚甲基键的核苷酸。用于核酸外切酶保护的其他优选的化学修饰包括ExoEndoLightEEL:将有义链中的所有嘧啶修饰为2’-0-甲基残基，并且修饰反义链中5’-UA-3’或5’-CA-3’基序中所有的嘧啶。另外，有义链的位置1也可以变成2’-0_甲基，防止有义链的5’-磷酸化，并且因此通过进一步使有义链失活而增加siRNA的特异性。另外，有义链还可以包含在位置14的2’-0_修饰，原因在于在该位置的2’-0_Me进一步使有义链失活，并且因此增加siRNAs的特异性。另外，用于核酸外切酶保护的其他优选的化学修饰包括甲基-氟MEF:在有义链上以2’-F起始5端和在反义链上以2’-O-Me起始的交替2氟和2’-0-甲基修饰的外保护exo-protection。另外，有义链的位置1还可以变为2’-0_Me，并且反义链的位置1变为2’-F由于这可以有效地被5’_磷酸化）。此外，通过引入硫代磷酸酯修饰的核苷酸能够修饰连接相邻的核苷酸的核糖核苷酸骨架。在本发明的意思内的更优选的化学修饰涉及用脱氧胸腺嘧啶核苷脱氧核糖核苷酸替代尿嘧啶核糖核苷酸。在本发明的另一个优选的实施方案中，所述至少一个化学修饰的核苷酸是在siRNA的有义链上、在反义链上或在两条链上。[0106]因此，在一个实施方案中，所述SiRNA包含或由选自由SEQIDNO.223-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列组成。[0107]上述siRNA分子可以使用本领域已知的方法以其天然结构递送至细胞内部。例如，当研究体外基因沉默时，使用标准转染试剂施用这些化合物。为了获得体内效果，这些化合物可以裸露施用，或者使用递送增强剂，如例如脂质体，与特定的结构部分缀合等进行施用，尽管本领域中已知多种不同的备选方案，并且取决于体内的所需要的靶向位点而不同地使用。[0108]备选地，本发明各个方面的siRNA分子可以由真核启动子在细胞中表达。能够表达siRNA分子的重组载体可以被递送至靶细胞中并且在靶细胞中永久存在。备选地，可以使用提供核酸分子的瞬时表达的载体。需要时，所述载体可以重复施用。一旦被表达，所述siRNA分子与祀标mRNA相互作用，并且产生RNA干扰反应。以这种方式产生的siRNA分子通常称为shRNA短发夹RNA，原因在于其有义链和反义链通过小的核苷酸环连接在一起。表达siRNA分子的载体的递送可以是系统性的，诸如通过静脉内或肌内施用，通过施用至来自受试者的外植体的靶细胞然后重新引入到所述受试者中，或者通过允许引入到所需要的靶细胞中的任何其他的方式。[0109]本发明的另一方面涉及靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的siRNA在制备用于治疗特征在于增加的ORAIl表达和或活性的眼病的方法中的药物中的应用。更优选地，所述至少一种序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地所述至少一种序列由SEQIDNO.1组成。所述方法包括抑制患者中的0RAI1的表达。术语抑制用来表示表达或活性的下降或下调。优选地，所述眼病是眼睛变态反应和或结膜炎。在一个实施方案中，所述眼病选自包括下述的组:季节性变应性结膜炎，常年性变应性结膜炎，春季角膜结膜炎，特应性角膜结膜炎，巨乳头状结膜炎，干眼综合征以及它们的组合。[0110]还提供治疗以增加的0RAI1表达和活性为特征的眼病的方法。所述方法包括抑制患者中的0RAI1的表达。所述方法可以包括施用靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的siRNA。更优选地，所述至少一种序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地，所述至少一种序列由SEQIDNO.1组成。[0111]在一些国家中，慢性变应性结膜炎和干眼综合征的组合是相当普遍的。增加的干眼问题是由于常见的人工气候、室内和室外污染物和其他未知的原因导致。患有干眼综合征的患者更倾向于患有眼睛变态反应，原因在于泪液膜是防止变应原与肥大细胞接触的重要屏障。[0112]预测使用针对ORAIlmRNA的siRNAs的治疗性治疗比小分子局部滴眼剂有益，其通过增加观察到的作用的时间的长度，由此允许较不频繁的给药和更大的患者依从性。在诸如眼睛变态反应和或结膜炎的情形中，包括但不限于春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎，由于它们通常是慢性病症，这是特别重要的。[0113]记得所述药物的制备，可以将本发明各个方面的siRNA配制为药物组合物。优选地，所述siRNAs的组合物和制剂可以局部施用至目的器官。在甚至更优选的实施方案中，它们可以配制用于局部施用至眼睛，优选地施用至眼睛的角膜表面。例如，应用至角膜表面可以以滴眼液、凝胶剂、洗液、乳膏或眼部插入物的形式进行。对眼睛的其他施用形式可以包括注射到眼睛中。[0114]本发明各个方面的更优选的实施方案涉及前述段落中所述的特异性靶向选自由SEQIDNO:I-SEQIDNO.Ill组成的组的至少一种序列的siRNA，其用作用于治疗以增加的ORAIl的表达和或活性为特征的眼病的药物。更优选地，所述至少一种序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地，所述至少一种序列由SEQIDNO.1组成。如前文所述，其可以是包含或由靶向选自由SEQIDN0:1-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的19个核苷酸双链结构组成的siRNA。该siRNA可以是平端的。优选地，所述siRNA包含或由选自由SEQIDNO.112-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列组成。用于本发明所述的应用的其他的siRNA包含或由来自由SEQIDNO.223-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列组成。[0115]在本发明的上下文中，为了“特异性靶向”某种序列，本发明的siRNA优选地包含至少相同的种子序列。因此，本发明所述的特异性靶向选自由SEQIDN0:1-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的任意序列优选地在反义链的位置2-8是相同的。更优选地，所述至少一种序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地，所述至少一种序列由SEQIDNO.1组成。[0116]尽管如上文所述，本发明各个方面的siRNAs可以用于沉默眼部之外的组织中的ORAI1表达。由此，所述siRNAs应该被相应地配制。[0117]例如，siRNA分子可以包含递送载体deliveryvehicle，包括脂质体，用于施用给受试者。载体和稀释剂及其盐可以存在于药用制剂中。核酸分子可以通过本领域技术人员已知的多种方法施用至细胞中，所述方法包括，但不限于，包封在脂质体中，通过离子电渗法，或通过结合在其他载体中，如生物可降解的聚合物、水凝胶、环糊精聚乳酸-共-乙醇酸）PLGA和PLCA微球体、可生物降解的纳米胶囊以及生物粘附性微球体，或通过蛋白质样载体进行。在本发明的一个实施方案中，所述siRNA分子可以通过细胞特异性siRNA载体递送，所述细胞特异性siRNA载体组合了乙型肝炎病毒的成分和脂质体。在另一个实施方案中，本发明的核酸分子还可以与聚乙烯亚胺及其衍生物一起配制或与聚乙烯亚胺及其衍生物复合，所述聚乙烯亚胺衍生物如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-N-乙酰半乳糖胺PEI-PEG-GAL或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-N-乙酰半乳糖胺PEI-PEG-三GAL衍生物。本发明的优选的组合物是水溶液，特别是盐水溶液，如pH范围在约7.0-约7.4、优选pH为7.2±0.5的磷酸缓冲盐水PBS。[0118]本发明的siRNA分子可以与膜分解剂和或阳离子脂质或辅助脂质分子复合。[0119]可以用于本发明的递送系统包括，例如，水性和非水性凝胶、乳膏、复合型乳剂、微乳剂、脂质体、油膏、水溶液和非水性溶液、洗液、气溶胶、经类基质和粉剂，并且可以包含赋形剂excipients，如增溶剂、渗透促进剂例如，脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇和氨基酸）、和亲水聚合物例如，聚卡波非和聚乙烯吡咯烷酮）。在一个实施方案中，药用载体是脂质体或透皮增强剂。[0120]本发明的药物制剂以适于施用例如，系统或局部施用至细胞或受试者中的形式存在，所述受试者包括，例如，人。适当的形式部分取决于应用或进入途径，例如，口服、经皮或通过注射的途径。其他因素在本领域中是已知的，并且包括这样的考虑，如毒性和防止所述组合物或制剂发挥其效果的形式。[0121]本发明还包括制备的用于存储或施用的组合物，其包含在药用载体或稀释剂中的药物有效量的需要的化合物。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂在制药领域中是公知的。例如，可以提供防腐剂、稳定剂、染料和调味剂。这些包括苯甲酸钠、山梨酸和对-羟基苯甲酸的酯。另外，还可以使用抗氧化剂和混悬剂。[0122]药物有效剂量是预防、抑制发生或治疗在某种程度上减轻症状，优选地减轻所有的症状疾病状态所需要的剂量。药物有效剂量通常取决于疾病的类型、所用的组合物、施用的途径、治疗的哺乳动物的类型、所考虑的具体的哺乳动物的体格特征、同时使用的药物和医学领域技术人员所认识到的其他因素。[0123]治疗有效量还可以指足以延缓或最小化与眼睛变态反应相关的眼部病症的发作的SiRNA的量。治疗有效量还可以指在与眼睛变态反应相关的眼部病症的治疗或管理中提供治疗益处的治疗剂的量。此外，关于本发明的SiRNA的治疗有效量意指单独的治疗剂的量，或与其他治疗剂组合的量，所述量在与眼睛变态反应相关的眼部病症的治疗或管理中提供治疗益处。与本发明的siRNA的量联系使用，该术语可以包括改善整体治疗、减少或避免不需要的作用或增强另一种治疗剂的功效或与另一种治疗剂协同作用的量。[0124]在诸如眼睛变态反应的眼部病症的治疗或管理中的治疗益处是变态反应症状的持续减少。鉴于siRNA将减少ORAI1在细胞内的水平，当治疗终止时，细胞必须重新合成新的蛋白。由此，基于siRNA治疗的疗法将具有更持久的效果。这被认为是治疗功效的显著提高。[0125]使用siRNA的另外的益处是由其在系统循环中的存在所导致的副作用或急性毒性问题的最小的可能性，而这些通常与不同的基于滴眼液的治疗相关。这是由于这样的事实：当所述化合物进入血流中时，其将迅速地被存在于血液中RNA酶降解。[0126]另一方面，本文所述的制剂可以以在单剂量的小瓶中市售的事实意味着可以避免向所述制剂中加入抗微生物防腐剂。防腐剂存在于现在的市场上的大部分制剂中。这些防腐剂在一些患者中产生不耐受性，使得其需要停止治疗。当考虑到如同眼睛变态反应和或结膜炎的病症包括但不限于，春季角膜结膜炎，特应性角膜结膜炎和巨乳头状结膜炎通常是慢性的，并且因此这样进行治疗时，这两个问题是特别重要的。[0127]—种优选的施用途径是局部施用，直接滴到眼睛中，优选地使用滴眼液进行。如上文所述，预计使用针对ORAIImRNA的siRNAs的治疗性治疗比小分子局部眼用滴剂有益，其增加所观察到的效果的时间持久性，由此允许较不频繁的给药和更大的患者依从性。[0128]然而，如前文所解释的，还可以使用除了直接给药到眼睛之外的给药途径。用于所述制剂的精确的剂量和给药时间表也将取决于给药途径。技术人员应该理解，要用的精确的剂量和给药时间表也取决于病症的严重性，并且应该按照执业者的判断和每名患者的情形来决定。还理解用于任意具体的受试者的特定的剂量水平取决于多种因素，包括所用的具体的化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径和排泄率、药物组合和治疗中的特定疾病的严重性。[0129]本发明的和本文所述的制剂或siRNA可以以单位剂量制剂进行给药，所述单位剂量制剂包含常规无毒药用载体、辅药和或赋形剂。制剂可以以适于口服应用的形式存在，例如，作为片剂、药片、锭剂、水性或油性混悬液、分散的粉剂或颗粒剂、乳液、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。旨在口服使用的组合物可以按照本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法进行制备，并且所述组合物可以包含一种或多种所述的增甜剂、调味剂、着色剂或防腐剂，以提供制药学上别致且美味的制剂。片剂包含与适于制备片剂的无毒药用赋形剂混合的活性成分。[0130]例如，这些赋形剂可以是惰性稀释剂;诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠;粒化剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸;结合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯树胶;和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是无包衣的，或者其可以通过已知的技术进行包衣。在一些情形中，所述包衣可以通过已知的技术制成，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，并且由此提供在较长的时间期间内的持续作用。例如，可以使用时间延迟物质，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。[0131]用于口服使用的制剂也可以作为硬明胶胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊存在，其中活性成分与水或油介质例如，花生油、液体石蜡或橄榄油混合。[0132]水性混悬液包含与适于制备水性混悬液的赋形剂混合的活性物质。所述赋形剂是混悬剂，例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基-甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶;分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂phosphatide，例如，卵磷脂，或烯烃氧化物与脂肪酸的缩合产物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如，十七乙烯氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与来源于脂肪酸与己糖醇的偏酯的缩合产物，如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与来源于脂肪酸与己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如，聚乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬液还可以包含一种或多种防腐剂，例如，乙基-或正丙基-对羟基苯甲酸酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种增甜剂，如蔗糖或糖精。[0133]油性混悬液可以通过将活性成分混悬在植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油）中或在矿物油如液体石蜡）中而配制。油性混悬液可以包含增稠剂，例如，蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入增甜剂和调味剂以提供可食用的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如抗坏血酸进行保存。[0134]适于通过加入水来制备水性混悬液的分散的粉剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、混悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。适当的分散剂或润湿剂或混悬剂例如上文已经提及的那些。也可以存在另外的赋形剂，例如，增甜剂、调味剂和着色剂。[0135]本发明的药物组合物还可以以水包油乳液的形式存在。油相可以是植物油或矿物油或这些的混合物。适当的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如，阿拉伯树胶或黄蓍树胶，天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂，和来源于脂肪酸和己糖醇、酸酐的酯或偏酯，例如，失水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如，聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可以包含增甜剂和调味剂。[0136]糖浆和酏剂可以用增甜剂进行配制，所述增甜剂例如甘油、丙二醇、山梨醇、葡萄糖或蔗糖。所述制剂还可以包含缓和剂、防腐剂和调味剂和着色剂。本发明的和本文所述的药物组合物或SiRNA可以以无菌注射用水性或油脂性混悬液的形式存在。[0137]这种混悬液可以按照已知技术使用上文已经提及的那些适当的分散剂或润湿剂和混悬剂来配制。[0138]无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可用的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或混悬液，例如，作为在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的赋形剂和溶剂是水、Ringer’s溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发的油常用作溶剂或混悬介质。为了这一目的，可以使用任意温和的不挥发的油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。另外，脂肪酸，如油酸，也用于制备注射剂。[0139]在优选的实施方案中，本发明的组合物配制在溶液中，优选地配制在缓冲的盐水溶液中，如PBS，或在用于局部给药到眼睛的凝胶中，如例如，以滴眼剂的形式。在此类实施方案中，所述制剂可以是阳离子乳液和或包含生物聚合物，包括，但不限于，聚（丙交酯-共-乙交酯），卡波普、透明质酸和聚丙烯酸。[0140]本发明的核酸分子还可以以栓剂的形式给药，例如，用于药物的直肠给药。这些组合物可以通过将药物与适当的无刺激性赋形剂混合而制备，所述赋形剂在常温是固体的但是在直肠温度是液体的，并且因此在直肠中熔融以释放药物。此类物质包括可可脂和聚乙二醇。[0141]本发明的核酸分子可以在无菌介质中肠胃外给药。取决于所用的赋形剂和浓度，药物可以混悬或溶解在赋形剂中。有利地，辅药，如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂，可以溶解在赋形剂中。[0142]由此，本发明的进一步优选的实施方案涉及药物组合物，其中所述组合物包含靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列的至少一种siRNA，如在前述段落中所述。更优选地，所述至少一种序列选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.8组成的组，并且甚至更优选地，所述至少一种序列由SEQIDNO.1组成。[0143]本发明的核酸分子还可以与其他治疗性化合物组合施用给受试者，以增加整体治疗效果。使用多种化合物来治疗适应证可以增加有益的效果同时减少副作用的存在。[0144]当用于本文时，术语“眼睛变态反应”是指由增加的0RAI1表达和或活性引起的眼睛表面的变态反应病症。其也可以称为变应性结膜炎。眼睛变态反应包括宽泛种类的病理病况，包括但不限于:季节性变应性结膜炎SAC，常年性变应性结膜炎PAC，春季角膜结膜炎VKC，特应性角膜结膜炎AKC，和巨乳头状结膜炎GPC。[0145]当用于本文时，术语“结膜炎”是指结膜的炎症。在印度，其可以称为红眼或马德拉斯眼madraseye。其通常是由于感染通常是病毒性的，但有时是细菌性的）或变态反应反应引起。[0146]眼睛变态反应的“临床症状”包括，但不限于，眼睛发痒，眼睛发红，眼睑肿胀，结膜水肿，流泪和鼻炎，鼻塞，流鼻涕，鼻瘙痒和耳腭瘙痒，和打喷嚏。优选地，本发明治疗或预防至少两种临床症状，更优选地至少三种，甚至更优选地多于四种症状。[0147]术语“患者”用在本文中是指动物，包括哺乳动物，优选人。[0148]当用于本文时，术语“变态反应原”是指环境中能够引起速发型超敏反应immediatehypersensitivity变态反应的任何抗原性物质。已知的变态反应原的列表包括植物花粉、霉菌的孢子、动物毛肩、室内尘埃、食物、羽毛、染料、皂类、洗涤剂、化妆品、塑料和药物。变态反应原可以通过吸入、吞入、接触或注射进入体内。空气传播的变态反应原是足够轻足以被气流运送的变态反应原，例如，但不限于，花粉或孢子。[0149]术语“变应性结膜炎”在本发明中应该理解为由变态反应反应引起的结膜的炎症。结膜是覆盖眼睛的薄膜。当变态反应原刺激结膜时，眼睛中发生的常见症状包括:发红主要是由于周围小血管的舒张导致），眼睛发痒，眼睑水肿，增加的流泪，畏光，水样分泌物，和异物感带有疼痛）。症状通常在天气温暖干燥时对患者加重，而凉爽的温度和下雨倾向于缓和症状。[0150]术语“眼睑炎”在本发明中应该理解为慢性眼睑炎症。[0151]术语“睑缘结膜炎”在本发明中应该理解为两种独立的眼病的同时发生:眼睑炎和结膜炎。眼睑炎影响外眼睑，而结膜炎发生在结膜中。[0152]术语“角膜结膜炎”在本发明中应该理解为角膜和结膜的炎症。[0153]在下述非限制性实施例中将进一步描述本发明。实施例[0154]〇·材料[0155]•小鼠ORAIl探针：Taqman基因表达测定Mm00774349_ml。[0156]•小鼠TLSP探针：Taqman基因表达测定Mm01157588_ml。[0157]•小鼠TNFSR9探针：Taqman基因表达测定Mm00441899_ml。[0158]·18S内源性对照：Taqman基因表达测定。Hs99999901_sl。[0159]·Multiscribe反转录酶50UmlAppliedBiosystemsPN4311235〇[0160]·RNA酶抑制剂20UAUAppliedBiosystemsPNN8080119。[0161]·TaqMan2X通用主混合物。[0162]•非放射性细胞增殖测定试剂盒？1'0111683，]\11111116；[111，德国）。[0163]•人肥大细胞HMC-I。[0164]•在DMSO中的离子霉素（Ionomycin|丐盐ImM购自SigmaLifeScienceRef#13909-lml。[0165]·Annexin-V检测试剂盒LifeTechnologiesRef:V13241〇[0166]1.体外分析[0167]1.1在不同细胞系中转染本发明的siRNAs后的ORAIl表达水平[0168]为了证明本发明的siRNAs的沉默作用，在不同细胞系中转染本发明选择的siRNAs之后，测量体外ORAIl表达水平。分别使用TransitTKO和Lipofectamine2000作为转染剂，将人A204和鼠C2C12与J744A.1细胞转染IOOnMSEQIDN0.11219bp的平端dsRNA结构）。所有的转染按照标准的供应商使用说明进行。在同一转染中，使用杂乱的（scrambledsiRNA序列作为干扰特异性的对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评估由于siRNA作用机制导致的可能的mRNA水平变化。RNA水平通过实时PCR利用相对定量方法即比较阈值2-ΔΔCT法进行定量。（Livak和Schmittgen，2001。所有的实时定量PCR实验一式三份进行，并且以三次独立的实验进行重复。计算平均值和标准偏差。如图4所示，SEQIDNO.112显著地在A204和C2C12细胞中降低ORAIlmRNA水平约70-80%，并且在J744A.1中降低ORAIImRNA水平40%。19bp的平端dsRNA结构：SEQIDNO.113,SEQIDN0.115，SEQIDNO.116,SEQIDNO.117,SEQIDNO.118和SEQIDNO.119,也显著降低ORAIImRNA表达水平约40-80%图5。[0169]1.2在转染本发明的siRNA后不同细胞系的细胞存活性[0170]为了证明本发明的siRNAs的细胞存活性，在不同细胞系中转染本发明选择的siRNAs之后，测量体外毒性水平。分别使用TransitTKO和Lipofectamine2000作为转染剂，将人A204和鼠C2C12与J744A.1细胞转染IOOnMSEQIDN0.11219bp的平端dsRNA结构）。所有的转染按照标准的供应商使用说明进行。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰特异性的对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评估由于siRNA转染导致的可能的细胞存活水平变化。细胞存活性使用购自Promega的CellTiter96權水性非放射性细胞增殖测定测量。该方法是基于活细胞脱氢酶将MTS四唑化合物还原为甲媵产物的能力，其通过490nm的吸光度测量。计算平均值和标准偏差。如图6所示，对于SEQIDNO.112,没有发现细胞存活水平的变化。因此，SEQIDNO.112无毒，并且是安全的。[0171]1.3在不同细胞系中转染本发明未修饰的和化学修饰的siRNA后的ORAI1表达水平[0172]为了改善本发明的siRNAs的稳定性并确保没有免疫原性激活，向典型的SEQIDNO.112序列（19bp的平端dsRNA结构）中引入不同的siRNA-优化的化学修饰；因此，获得新的化学修饰的实体（SEQIDN0.223，SEQIDN0.224，SEQIDN0.225，SEQIDN0.226，SEQIDNO.227，SEQIDNO.228和SEQIDNO.229，并且转染到人和鼠细胞中，以证明它们降低ORAIImRNA水平的能力。化学修饰详细显示在图3中。分别使用TransitTKO和Lipofectamine2000作为转染剂，将人A204和鼠C2C12与J744A.1细胞转染IOOnM的SEQIDNO.112,SEQIDNO.223,SEQIDNO.224,SEQIDNO.225,SEQIDNO.226,SEQIDNO.227,SEQIDNO.228或SEQIDNO.229所有这些结构都对应19bp的平端dsRNA结构）。所有的转染按照标准的供应商使用说明进行。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰特异性的对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评价由于siRNA-处理导致的可能的mRNA水平变化。RNA水平通过实时PCR利用相对定量方法（即比较阈值2-ΔΔCT法进行定量{Livak和SChmittgen，2001}。所有的实时定量PCR实验一式三份进行，并且以三次独立的实验进行重复。计算平均值和标准偏差。如图7和图8所示，在人和鼠细胞系中，修饰的siRNAs显示出极好的功效，比得上SEQIDNO.112。因此，化学修饰的产物SEQIDNO.223,SEQIDNO.224,SEQIDNO.225,SEQIDNO.226,SEQIDNO.227,SEQIDNO.228和SEQIDNO.229降低ORAIImRNA水平50-80%。[0173]1.4SEQIDNO.112和SEQIDNO.227在人和鼠细胞中的剂量响应[0174]分别使用TransitTKO和Lipofectamine2000作为转染剂，将人A204和鼠C2C12细胞转染以增加剂量的SEQIDN0.11219bp的平端dsRNA结构，SYL116011和SEQIDN0.22719bp的平端dsRNA结构，SYLl1601lv80.OOl-IOOnM。所有的转染按照标准的供应商条件进行。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰的特异性对照。收集细胞沉淀物，并且处理，以评估由于siRNA作用机制导致的可能的mRNA水平变化。RNA水平通过实时PCR利用相对定量方法（即比较阈值2-ΔΔCt法进行定量。{Livak和Schmittgen，2001}。所有的实时定量PCR实验一式三份进行，并且以三次独立的实验进行重复。计算平均值和SEM。如图9所示，在人细胞中，在〇.5nM的剂量下观察到0RAI1水平显著降低。响应IOOnM剂量的SEQIDNO.112和SEQIDNO.227两者，观察到最大的作用。在浓度10-50nM之间，观察到SEQIDNO.112和SEQIDNO.227的小差异。SEQIDNO.227降低ORAIImRNA水平60-80%，而SEQIDNO.112降低ORAIImRNA水平40-60%。在浓度0.05-0.OOlnM之间没有观察到差异。使用这些数据，计算抑制性浓度50IC50值为：关于SEQIDN0.227为1.98nM，关于SEQIDN0.112为5.3nM〇[0175]如图10所示，在鼠C2C12细胞中，以2.5nM的剂量也观察到显著的0RAI1水平降低。响应50nM剂量的SEQIDNO.112和SEQIDNO.227,观察到最大作用。在浓度5-100nM之间，观察到SEQIDNO.112和SEQIDNO.227的小差异。SEQIDNO.112和SEQIDNO.227都降低ORAIlmRNA水平70-80%。在浓度0.1-0.OOlnM之间没有观察到差异。使用这些数据，计算抑制性浓度50IC50值为：关于SEQIDN0.227为1.98nM，关于SEQIDN0.112为1.25nM。[0176]1.5在转染SEQIDNO.112和SEQIDN0.227后，ORAIl及其旁系同源物0RAI2和0RAI3的表达[0177]为了证明本发明的siRNAs的特异沉默作用，在不同细胞系中转染本发明选择的siRNAs之后，测量体外0RAIl、0RAI2和0RAI3表达水平。我们分析SEQIDN0.112和SEQIDNO.227对ORAI通道家族的受体的作用，从而分析其对与0RAI1通道结构和功能相关的蛋白的作用。在用SEQIDNO.112和SEQIDNO.227处理后，评估人A204和C2C12鼠细胞中的0RAI1、0RAI2和0RAI3mRNA水平。分别使用TransitTKO和Lipofectamine2000作为转染剂，将人A204和鼠C2C12细胞转染IOOnMSEQIDNO112和SEQIDNO227。所有的转染按照标准的供应商条件进行。在同一转染中，使用杂乱的SiRNA序列作为干扰的特异性对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评估由于siRNA作用机制导致的可能的mRNA水平变化。图11和图12显示，SEQIDNO.112和SEQIDNO.227能够选择性地降低ORAIImRNA的水平，在人细胞中约70-80%，而不显著影响0RAI2或ORAI3的mRNA水平（图11，并且在鼠细胞中为60-70%图12。[0178]1.6在人细胞中转染SEQIDN0.112SYL116011后，推定的OTEs的表达。[0179]为了证明本发明的siRNAs关于非预期的靶标的特异性沉默作用，在人细胞系中确定SEQIDNO.112的推定的在计算机芯片上的脱革E效应（insilicooff-targetseffectsOTEs。在人细胞系中转染本发明选择的siRNAs之后，测量MSLN和0LFM12A表达水平。我们分析了SEQIDNO.112对MSLN和0LFM12A基因表达的作用。在使用TransitTKO作为转染剂，用IOOnMofSEQIDNO.112处理后，评估人A204细胞中的MSLN和0LFM12AmRNA水平。所有的转染按照标准的供应商条件进行，并且具有阳性和阴性对照。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰的特异性对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评价SEQIDNO.112的作用机制导致的推定的OTEsmRNA水平可能的变化。图13显示SEQIDNO.112不降低推定的OTEs的水平。[0180]1.7在大鼠细胞系中转染SEQIDNO.112后的0RAI1表达水平[0181]为了证明SEQIDNO.112的沉默作用，在不同细胞系中转染本发明选择的siRNAs之后，测量体外0RAI1表达水平。分别使用TransitIT2020和Lipofectamine2000作为转染剂，将大鼠JTC-19和C6细胞转染以IOOnM的SEQIDNO.112。所有的转染按照标准的供应商条件进行，具有阴性对照。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰的特异性对照。在转染实验后24、48和72小时收集细胞沉淀物，并且处理，以评估由于siRNA作用机制导致的可能的mRNA水平变化。RNA水平通过实时PCR利用相对定量方法（即比较阈值2-ΔΔCT法）进行定量ILivak和Schmittgen，2001}。所有的实时定量PCR实验一式三份进行，并且以三次独立的实验进行重复。计算平均值和SEM。如图14和图15所示，SEQIDNO.112显著降低ORAIImRNA水平，在JTC-19细胞中降低约70%，并且在C6细胞中降低40-70%。对于SEQIDNO.112，在72小时，在JTC-19细胞中，ORAIImRNA水平没有完全恢复，但是在C6细胞中恢复图14和图15。[0182]1.8在转染SEQIDN0.112SYL116011、SEQIDN0.233SYL116011vll和SEQIDN0.235SYL116011vll后，ORAIl的基因表达水平。[0183]分别使用TransitTKO、Lipofectamine2000和MirusIT2020作为转染剂，将人A204、鼠C2C12和JTC-19大鼠细胞转染IOOnM的SEQIDNO.11219bp的平端dsRNA结构，SYL116011和SEQIDN0.23319bp的平端dsRNA结构，SYL116011vll以及SEQIDN0.23519bp的平端dsRNA结构，SYLl16011V12。所有的转染按照标准的供应商条件进行。在同一转染中，使用杂乱的siRNA序列作为干扰的特异性对照。收集细胞沉淀物，并且处理，以评价由于siRNA作用机制导致的可能的mRNA水平变化。RNA水平通过实时PCR利用相对定量方法即比较阈值2-〇?法进行定量{1^¥1^和5311111；[1^8611，2001}。如图16所示，在人、鼠和大鼠细胞中观察到ORAIl水平大量降低。对于SEQIDN0.112SYL116011、SEQIDN0.233SYL116011vll和SEQIDN0.235SYL116011vll，在人细胞中，ORAIlmRNA水平降低70-80%。在鼠细胞中，对于SEQIDN0.112SYL116011、SEQIDN0.233SYL116011vll和SEQIDN0.235SYL116011vll,ORAIlmRNA水平降低50%，而在大鼠细胞中，对于SEQIDN0.112SYL116011，降低50%，对于SEQIDN0.233SYL116011vll和SEQIDN0.235SYL116011vll分别降低95%和99%。[0184]2.体内分析[0185]2.1在豚草花粉诱导的眼睛变态反应小鼠模型中分析SEQIDN0.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8的体内功效。[0186]本研究的目的是分析本发明设计来沉默ORAIl的表达的siRNAs[具体是SEQIDNO.11219bp的平端dsRNA结构，SYL116011和SEQIDN0.22719bp的平端dsRNA结构，SYL116011v8]减轻豚草花粉诱导的眼睛变态反应小鼠模型中与眼睛变态反应相关的症状的功效。[0187]豚草是葵花家族菊科Asteraceae豚草属Ambrosia的开花植物。豚草花粉是高度变应性的，通常认为是世界上所有空气传播的花粉的最大的气源性变态反应原和花粉热hayfever的主要原因。国家环境健康科学研究所（NationalInstituteofEnvironmentalHealthScience，NIE；HS表明，膝草和其他的杂草，诸如皱叶酸模curlydock，藜（lambsquarters，猪草（pigweed，车前属（piantain，酢衆草属（sheepsorrel和蒿属（sagebrush，是世界上最丰富的花粉变态反应原制造者中的一些。该花粉通常用于研究变应性结膜炎的动物模型{BacsiA等2005}。[0188]本分析的目的是确定通过眼部滴注本发明的化合物SEQIDN0.112SYL116011和SEQIDN0.227SYL116011v8下调0RAI1是否减轻小鼠中由豚草花粉诱导的眼睛变态反应引起的症状。[0189]我们已经分析了0RAI1是否在小鼠眼睛中表达，以及其表达是否响应豚草花粉诱导的眼睛变态反应被上调。我们还已经评估了使用局部施用的SEQIDNO.112SYL116011或SEQIDNO.227SYLl16011ν8沉默ORAI1表达对上文提及的小鼠模型中的变应性反应的作用。为了这一目的，已经分析了下述参数：[0190]·响应变态反应诱导的临床迹象:变应性结膜炎的典型眼部迹象包括发痒、眼睑肿胀、结膜肿胀结膜水肿）和粘液沉积。与眼睛变态反应相关的粘液是量多的、粘稠的，甚至是粘性的。结膜的变化通常引起球结膜呈现“玻璃样”外观，并且睑结膜的颜色比红色更粉色，通常具有乳白色外观。[0191]·局部肥大细胞的数目：在变应性刺激后数分钟，结膜肥大细胞脱粒化;炎性介质的释放吸引更多的从结膜深层迀移的肥大细胞。[0192]·嗜酸性粒细胞的局部浸润:在变态反应原暴露后数小时，发生炎性细胞向结膜的浸润，并且作为针对变态反应原的后期反应的一部分。尽管一些不同类型的细胞迀移到结膜，主要类型还是嗜酸性粒细胞。[0193]•变态反应相关的分子生物标记的表达变化:[0194]◦胸腺间质淋巴细胞生成素TLSP是上皮来源的细胞因子，其通过与其特异性的受体TLSPR结合而激活树突细胞。TLSP与TLSPR的结合诱导Th2-型炎性反应。TLSP主要由上皮细胞产生，但是也可以由肥大细胞产生，并且已经发现在变应性炎症部位被上调{ZhengX.等2010}。[0195]◦肿瘤坏死因子受体超家族，成员9Tnfrsf9或⑶-137是记忆T细胞的共同刺激剂。该共同刺激剂在激活的T细胞、NK细胞和树突细胞DC中表达，而已经在成熟的DV、激活的巨噬细胞和激活的B细胞上检测到其配体CD137UCD-137共同刺激T细胞激活和增殖，增强激活的T细胞的存活并且抑制CD4+T辅助细胞。在变应性炎症中，已经表明，其介导IL-4依赖性Th2应答，并且在具有IgE介导的变应性反应的患者的嗜酸性粒细胞中被上调。[0196]A.方法[0197]a.1测试系统表征[0198]表1.测试系统表征[0199][0200]本发明的siRNAs的另一个优点是，在不同动物序列之间，SEQIDNO.I-SEQIDNO.8对应ORAI1基因的高度保守区域。事实上，这些序列在人和小鼠之间是相同的，这使得该动物模型特别适合用于眼睛变态反应的研究。[0201]a.2变态反应的诱导[0202]通过在第1天腹膜内注射，用50yg豚草Rw花粉在0.25ml明矾中的混合物免疫动物而诱导变应性结膜炎。在施用之前立即制备免疫溶液，并且在所有时刻避光。免疫后十天，将1.25mgRw花粉局部滴注到每只眼睛中。施用以5μ!7眼睛的剂量体积进行。该方法由本领域专家已知的标准的已有的公开的流程修改而成，并且在评估siRNAs的功效之前进行了验证{]\^〇116]\1.1'.等1998}〇[0203]a.3测试项目施用[0204]从第6天开始，在5天的期间内，每天一次将测试项目通过局部眼睛途径应用到动物的两只眼睛（图4。一个独立组的动物施用赋形剂PBS并作为对照。施用以5μ!7眼睛的剂量体积进行。[0205]a.4临床观察和样品收集[0206]从第一次施用直到处死，每天监测动物的一般健康状态。在滴注局部眼睛花粉之前，以及在花粉滴注后不同时间点直到24小时，检查小鼠的临床超敏迹象。结膜水肿和充血、眼睑肿胀、分泌物和流泪按等级0-3分级。由对实验条件不知情的实验观察者进行临床评分。在变态反应攻击后3或24小时处死动物。在处死之前，采集血液样品，以评估血浆中IgE，IL-13;IL-10和MCP-I的存在。在处死后，分离眼睛、脾和颈淋巴结，并且处理用于组织学，保存用于后续RNA或者处理用于分析结膜中上文提及的细胞因子的水平。[0207]a.5组织学[0208]将摘除的眼睛浸没在10%甲醛（120体积）中24小时，然后用0,IM磷酸缓冲液洗涤几次去除甲醛，并且在该缓冲液中保持几乎24小时。通过将样品在浓度递增的乙醇中温育，而将样品脱水，然后包埋在组织处理器（LeicaTP1020，Cat.n〇-070437101，LeicaMicrosystems，Nussloch,Germany的低恪点石錯中。将样品在切片机中切割，以获得2μηι的切片，然后用甲苯胺栏染色以计数肥大细胞数目或者用苏木精-曙红染色以评估嗜酸性粒细胞浸润。[0209]a.6RNA分离和反转录[0210]使用RNeasyRNA提取试剂盒（Invitrogen，CA，USA从完整的眼睛、脾或淋巴结中分离总RNA。使用High-CapacitycDNAArchive试剂盒AppliedBiosystems，Inc.,Foster^7^，1^，按照供应商的使用说明和11'-8-0003-01，将4以8的总1?熟反转录。[0211]a.7qPCR[0212]使用Steponeplus检测系统（AppliedBiosystems进行qPCR。在下述条件下：95°CIOmin，然后是40个循环：95°C15s和60°CImin，使用TaqMan2X通用主混合物扩增500纳克的每种样品。所有的qPCR扩增一式三份进行，并且以至少两次独立的实验重复进行，总是包括反转录对照和无模板对照。使用相对定量的AACT法通过qPCR分析ORAIl、TLSP和Tnfrsf9mRNA水平，其中使用18S基因作为内标{LivakK.J·和SchmittgenT.D.，2001}。[0213]a·8分析血浆和结膜中的IgE，IL-13;IL-10和MCP-I[0214]使用下述试剂盒并按照供应商的使用说明，评估小鼠血浆和结膜中下述细胞因子的量：IgE，IL-13，IL-10和MCP-I。[0215]B.结果[0216]b.1小鼠眼中的ORAI1表达和响应眼睛变态反应的诱导。[0217]在如方法部分所述诱导变态反应后的不同时间点评估小鼠眼睛中的ORAIl表达。图17显示ORAIl存在于眼睛中，并且其表达响应变应性攻击快速上调。在施用豚草花粉后3-6小时观察到ORAIlmRNA水平增加两倍。攻击后24小时，ORAIl水平约是基底水平的350%。[0218]b.2评估响应眼睛变态反应的变态反应生物标记的表达。[0219]在通过对预先致敏的小鼠滴注豚草花粉诱导眼睛变态反应后的不同时间点，研究TLSP和Tnfrsf9的mRNA水平。在攻击后3小时观察到TLSP和Tnfrsf9二者的显著诱导。诱导后24小时，TnfrsfOmRNA水平接近基线水平，而TLSP的mRNA水平仍然是基底水平的约1.5倍高图18。[0220]b.3SEQIDN0.112SYL116011在眼睛变态反应小鼠模型中的功效。[0221]如方法部分所述，对三组动物腹膜内（IP注射一定剂量的吸附在明矾上的豚草花粉。IP注射后五天，一组A，η=8在五天的期间每天接受PBS的眼部滴注，第二组B，η=15在相同的时间期间内接受剂量为150yg眼睛天低剂量）的SEQIDNO.112SYL116011，而第三组在5天内接受剂量为375yg眼睛天高剂量）的SEQIDN0.112SYL116011。在眼部滴注花粉后1，3,6和24小时，检查动物与眼睛变态反应相关的症状。如在图20中所示，使用任一剂量的SEQIDN0.112SYL116011治疗显著降低变态反应速发型临床迹象。临床迹象的进一步分析表明，两种剂量的SEQIDNO.112SYL116011对所研究的两个参数都具有特别的作用:结膜水肿结膜的肿胀和流泪（图21。[0222]在诱导眼睛变态反应后3小时，评估睑结膜和球结膜中的肥大细胞浸润。以375yg眼睛天的剂量施用的SEQIDNO.112SYLl16011引起浸润到睑结膜和球结膜两者中的肥大细胞数目的显著降低（图22。[0223]在攻击后24小时，评估结膜中的嗜酸性粒细胞浸润。同样地，在结膜的两个区域中都观察到响应高剂量的SEQIDNO.112SYLl16011的浸润的嗜酸性粒细胞的显著降低，以及在球结膜中，观察到响应低剂量的浸润的嗜酸性粒细胞的显著降低（图23。[0224]完整眼睛中变态反应生物标记TLSP的分析表明该标记响应SEQIDNO.1123丫1^116011的剂量依赖性的减少。在变应性攻击后3小时^0-1371'11打8€9的表达还响应SEQIDN0.112SYL116011显著降低。如图11所示，该变态反应标记在变态反应诱导后3小时被显著诱导（图24。[0225]b.4SEQIDN0.227SYL116011v8在眼睛变态反应小鼠模型中的功效[0226]此外，进行另一项体内实验，其中三组动物腹膜内（IP注射一定剂量的吸附在明胶上的豚草花粉，如在方法部分中所述。IP注射后五天，一组A，n=10在五天的期间每天接受I3BS的眼部滴注，第二组B，η=10在相同的时间期间内接受剂量为450yg眼睛天的本发明的另一种化合物（SEQIDN0.227SYL116011v8，而第三组在5天内接受2yL〇.5mgml的左卡巴斯汀。左卡巴斯汀是目前销售用于治疗眼睛变态反应的第二代Hl受体拮抗剂。在眼部滴注花粉后0.5,1，3,6和24小时，检查动物与眼睛变态反应相关的症状。如图25所示，用SEQIDN0.227SYL116011v8处理显著降低临床变态反应迹象；临床迹象的减少大于响应左卡巴斯汀观察到的减少。临床迹象的进一步分析表明，当与PBS处理的动物相比较时，SEQIDNO.227SYLl16011v8改善所有研究的参数。因此，证明该化合物是眼睛变态反应的有效治疗性治疗。[0227]2.2在实验变应性结膜炎鼠模型中评价SEQIDN0.112SYL116011的体内作用。[0228]本研究的目的是评价本发明设计来沉默0RAI1表达的siRNAs减轻鼠模型汇中与变应性结膜炎相关的变应性症状如充血，斜视，分泌物和眼睑肿胀的作用。[0229]本研究的目的是评价通过眼部滴注SEQIDNO.11219bp的平端dsRNA结构，SYLl16011下调ORAI1是否减轻变应性结膜炎鼠模型中的变应性症状充血，斜视，分泌物和眼睑肿胀）。关于阳性对照，使用常用的药物，即，抗变态反应的帕坦洛®。帕坦洛⑧0.1%奥洛他定Olopatadine是作为滴眼剂施用的抗组胺肥大细胞稳定剂双重作用剂。帕坦^洛⑧阻断组胺的作用，并且防止肥大细胞释放引起变态反应症状的化学物质。局部施用PBS赋形剂）用作阴性对照。[0230]A.方法[0231]在本研究中，在第0天，用与氢氧化铝混合的短豚草致敏雌性BalbC小鼠。在第18天，在局部处理之前，用在平衡盐溶液BSS中的短豚草局部致敏小鼠，以去除认为对攻击不响应的小鼠。不响应的是与基线相比不具有至少2个单位的充血变化的小鼠。由于响应者的数目少，在第21天将小鼠再次致敏。在第24天，重复第18天的步骤，以鉴定响应者。选择48只小鼠用于本研究，并且随机分成6组，每组8只。预防性治疗组在第25-27天接受它们各自的局部药物第2,3和5组每天一次;第6组每天四次）。在第28-31天，将小鼠每天用豚草局部攻击两次，同时接受它们各自的药物（除帕坦洛⑯组每天接受三次剂量外，所有组每天一次）。在第一次、第四次、第六次和第八次攻击后，用评价来评估动物的充血、斜视、分泌物和眼睑肿胀。[0232]a.l动物[0233]将小鼠笼养在具有直接接触的垫子的聚碳酸酯笼子中（ALPHA-dH®。笼子符合动物福利法AnimalWelfareAct和实验室动物护理和应用指导GuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimals中所述的标准。对于动物推荐的生活空间符合PHS政策和AWA。动物笼中的废物或垫子按照保持动物干燥清洁所需经常更换。[0234]给动物随意喂饲新鲜、可口和充分营养的食物。随意提供清洁、可以饮用且没有污染的水。设定环境控制以保持温度为22±4°C68±5〇F，相对湿度为50±20%。保持12小时光暗循环。在基线评价之前，将动物在到达后在设施中适应至少5天。在整个研究中不需要兽医工作人员。[0235]a.2变态反应原致敏[0236]•途径:皮下，两个后小腿。[0237]•频率:对于所有组，在第0天和第21天。[0238]•步骤:对于每次致敏，接受SRW的动物接受50yL在0.65mg氢氧化铝中的IOOyg豚草。[0239]a.3给药[0240]如所述，对所有组施用SEQIDN0.112SYL116011的局部治疗剂、作为阳性对照的帕坦:洛®或赋形剂对照。使用校准的微量移液器，对小鼠角膜局部给药，每只眼睛3yL治疗用滴剂。在预防性治疗日过程中（第25_27天），每天在约9am，l2pm，2Pm和5Pm对帕坦洛®:动物给药四次。所有时间为±60分钟，并且将准确的给药时刻记录在研究活页本上。第2，3，5和6组动物在约lpm±60分钟接受它们的局部剂量。在攻击的日子第28-31天），在攻击的日子的约9am，Ipm和4pm，帕坦洛®小鼠每天给予三次;然而，给药的时间是±9〇分钟。所有其他组在约Ipm给药。同样地，将准确的给药时刻记录在研究活页本上。[0241]a.4变态反应原攻击[0242]•途径:眼睛应用，两只眼睛。[0243]•频率:在第18天，进行筛选SRW攻击，以鉴定响应者。在基线、在SRW攻击之前评价小鼠。然后，在攻击后18±1分钟，再次评价动物。由于缺少响应者，所以延缓研究。在第21天进行第二次致敏，并且在第24天重复筛选SRW攻击。在第25-27天，第2，3，5和6组开始它们各自的预防性治疗。在第28-31天，在第一次每日帕坦洛®剂量后和第三次每日帕坦洛⑧剂量后约30分钟进行BID攻击。在第28-31天，在第28天的第一次局部剂量后和在第29-31天的第三次局部剂量后，在帕坦洛®局部剂量后30分钟评价动物，然后在评价后攻击〜3分钟，并且在攻击后（1，4，6和8次局部攻击后）18分钟再次评价。[0244]•步骤:小鼠用每只眼睛中局部剂量为150ygSRW3yl50mgmL混悬液在3μ1平衡盐溶液BSS中）攻击。在第24天，基于小鼠从基线充血的变化，将动物随机化。[0245]a.5组织采集[0246]将动物处死，并且在确认动物死亡后，取出右眼和周围的附件，并且在Davidson’s固定剂中保存24小时。固定24小时后，将组织转移到70%乙醇中长期保存。将眼睛石蜡包埋，和对每只眼睛制备1个HE，1个TBlue，和1个未染色的载玻片。[0247]a.6统计学方法[0248]使用Bonferroni事后检验的双向ANOVA分析数据，以比较各组间临床迹象的差异。[0249]B·结果[0250]关于充血、斜视、眼睑肿胀和分泌物的数据为N=S只眼睛的平均值土SEM。在1，4,6和8次攻击时，由同一名不知情的观察者评价小鼠，所述攻击分别发生在第28,29,30和31个研究日。对于充血、斜视和分泌物，以0-4级严重性评价动物0是正常的，4是最严重的）。对于眼睑肿胀，以0-2等级将小鼠分级。对于每个终点，在给药后30分钟仅对帕坦洛德或恰好在那一天攻击前的基线对于所有其他组评价动物。所有组通过Bonferroni事后检验的双向ANOVA进行分析，并且用星号标记相对于赋形剂的任意统计学显著性。[0251]b.l给药后充血的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®和赋形剂预防性。[0252]数据为每组n=8只眼睛的平均值土SEM。在第28天第一次攻击后，帕i旦洛⑩表现出统计学较低的响应P〈〇.〇l。预防剂量的SEQIDN0.112SYL116011表现出与具有帕坦洛®的相似的趋势，但是没有观察到统计学显著性见图26。[0253]b.2给药后斜视的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®和赋形剂预防性。[0254]数据是每组n=8只眼睛的平均值土SEM见图27。没有观察到统计学显著性。[0255]b.3给药后眼睑肿胀的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®和赋形剂预防性。[0256]数据是每组n=8只眼睛的平均值土SEM见图28。没有观察到统计学显著性。[0257]b.4给药后分泌物的变化-SEQIDN0.112SYL116011预防性相对于帕坦洛®.和赋形剂预防性。[0258]数据是每组n=8只眼睛的平均值土SEM见图29。没有观察到统计学显著性。[0259]C·结论[0260]在研究结尾时，似乎SEQIDN0.112SYL116011预防性符合相同的减轻充血、眼睑肿胀和分泌物的趋势（见图26-29，然而，当通过Bonferroni事后检验的双向ANOVA分析这些数据时，其不是统计学显著的，这是由于本研究所用的较低的N。[0261]值得注意的是，当评价本发明设计来沉默ORAIl表达的SEQIDNO.112SYL116011的作用时，结果表明SEQIDN0.112SYL116011组中的剂量-响应的趋势与用帕坦洛®治疗的组的趋势相似，帕坦洛⑧是目前市售的已知的抗变态反应药物，在两种情形中都减轻了鼠模型中与变应性结膜炎相关的变应性症状。预计使用更高的N，数据的分析将变为统计学显著的。[0262]参考文献[0263]·AngajiS·A，HedayatiS·S，PoorR·H，等·“AppIication〇fRNAinterferenceintreatinghumandiseasesRNA干扰在治疗人疾病中的应用）”JGenet.2010.Vol.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权利要求：1.用于治疗和或预防以增加的ORAIl表达和或活性为特征的眼病的SiRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列。2.根据权利要求1所述的SiRNA分子，其中所述眼病是眼睛变态反应和或结膜炎。3.根据权利要求1或2所述的SiRNA分子，其中所述眼病选自季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、巨乳头状结膜炎、干眼综合征和它们的组合。4.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子，其中所述siRNA包含19个核苷酸的双链区域。5.根据权利要求4所述的SiRNA分子，其中所述SiRNA是平端的。6.—种siRNA分子，其中所述分子特异性靶向选自由SEQIDNO.I-SEQIDNO.111组成的组的至少一种序列，并且在引入到细胞时减少ORAIl基因的表达，并且其中所述SiRNA包含19个核苷酸的平端双链结构。7.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子，其中所述siRNA包含选自由SEQIDN0.112-SEQIDN0.229组成的组的至少一种序列或者由选自由SEQIDN0.112-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列组成。8.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子，其中至少一个核苷酸包含化学修饰。9.根据权利要求8所述的siRNA分子，其中核苷酸的所述化学修饰选自：2’-0甲基化和用脱氧胸腺嘧啶核苷酸置换尿嘧啶核糖核苷酸，以及它们的组合。10.根据权利要求8或9所述的siRNA分子，其中所述化学修饰是在有义链上、反义链上或在两者上。11.根据权利要求8至10中任一项所述的siRNA分子，其中所述siRNA选自来自由SEQIDNO.223-SEQIDNO.229组成的组的至少一种序列。12.根据前述权利要求中任一项所述的siRNA分子在制备用于治疗眼病的药物中的用途，所述眼病的特征为增加的ORAIl表达和或活性。13.根据权利要求12所述的用途，其中所述眼病是眼睛变态反应和或结膜炎。14.根据权利要求12或13所述的用途，其中所述眼病选自季节性变应性结膜炎、常年性变应性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、巨乳头状结膜炎、干眼综合征和它们的组合。15.—种药物组合物，其中所述组合物至少包含权利要求1-11中所述的一种siRNA分子。

百度查询： 西伦蒂斯私人股份公司 siRNA及其在用于抑制ORAI1基因表达的方法和组合物中的应用

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