申请/专利权人：安徽中医药大学

申请日：2016-11-21

公开（公告）日：2020-01-17

公开（公告）号：CN106420931B

主分类号：A61K36/60(20060101)

分类号：A61K36/60(20060101);A61P17/00(20060101);A61P17/18(20060101);A61K8/9789(20170101);A61Q19/02(20060101);A61Q19/08(20060101);A23L33/105(20160101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.01.17#授权;2017.03.22#实质审查的生效;2017.02.22#公开

摘要：本发明公开了一种葡蟠提取物及其用途，是以葡蟠为原料提取后获得。本发明葡蟠提取物具有很好的美白和抗衰老的功效，可用于护肤品、保健食品和医药领域，尤其是可应用于护肤品中。

主权项：1.一种葡蟠提取物，其特征在于是以葡蟠为原料提取后获得，包括如下步骤：1将葡蟠原料浸渍入有机溶剂中，室温下超声提取后过滤，减压浓缩后获得葡蟠粗提物；2将所述葡蟠粗提物经过吸附树脂吸附和有机溶剂洗脱，干燥后获得葡蟠活性富集提取物，即为葡蟠提取物；步骤1中所述有机溶剂为体积浓度70％的乙醇溶液；葡蟠原料与有机溶剂的料液比为1g:10mL；步骤2中洗脱时所用有机溶剂为体积浓度60％的乙醇溶液；所述吸附树脂为AB-8。

全文数据：一种葡蟠提取物及其用途技术领域[0001]本发明涉及一种葡蟠提取物及其用途，属于天然产物化学领域。背景技术[0002]葡蟠Broussonetiakaempferi是落叶灌木，高可达3米。枝条细长，有时常带蔓状，小枝细长疏生，略呈〃之〃字形，幼时有短柔毛，不久即变光滑，呈暗紫色。叶互生，卵状椭圆形或卵状批针形，长4~9厘米，宽3~5厘米。基部偏斜，圆形或稍呈心脏性，先端长尖，具2~3个乳头状腺体，三出羽状脉，边缘有锯齿，不裂或深裂。表面绿色，具粗糙伏毛，背面淡绿色，有细毛，叶柄长7~12毫米。花绿色，单性同株，雄花序茅荑状，近椭圆形，生于新枝叶腋，萼4裂，雄蕊4枚，雌花生新枝上部叶腋，成球形头状花序，花萼管状，3~4齿，子房上位，有柄。复果球形，红色。产我国中部和南部各省；多生于山坡和沟谷丛林或岩石边。葡蟠以根、叶入药，能清凉解毒，治跌打损伤，腰痛。但是，目前尚未见有关于葡蟠在美容护肤方面，尤其是抗衰老和美白方面的研究和应用。发明内容[0003]本发明的目的在于提供一种葡蟠提取物及其用途，旨在将葡蟠中的活性提取物应用于皮肤外用剂中，以起到美容护肤的作用。[0004]本发明葡蟠提取物，是以葡蟠为原料提取后获得，包括如下步骤：[0005]1、将葡蟠原料浸渍入有机溶剂中，室温下超声提取后过滤，减压浓缩后获得葡蟠粗提物；[0006]2、将所述葡蟠粗提物经过吸附树脂吸附和有机溶剂洗脱，干燥后获得葡蟠活性富集提取物，即为葡蟠提取物。[0007]将提取所得葡蟠粗提物和葡蟠提取物分别进行抗衰老作用和美白作用的实验研究。[0008]步骤1和步骤2中所述有机溶剂是指含有羟基或羰基等极性基团的有机溶剂，例如但不限于:水、甲酰胺、二甲基甲酰胺、三乙胺、三丁胺、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇溶液、醋酸纤维、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇、乙醚中的一种或几种，其中优选乙醇溶液。[0009]步骤1中有机溶剂优选为乙醇溶液，进一步优选为体积浓度70%的乙醇溶液。[0010]步骤2中洗脱时所用有机溶剂优选为乙醇溶液，进一步优选为体积浓度60%的乙醇溶液。[0011]步骤1中葡蟠原料与有机溶剂的料液比为1g:8-15mL，优选为1g:1OmL。[0012]所述吸附树脂即大孔吸附树脂，优先选择弱极性或中等极性的吸附树脂，例如4_5、△8-8、0101、乂0六-6、1^-21、疆-9、03520、10等，其中优选48-8树脂，48-8为聚苯乙烯型非极性吸附树脂，表面有一定的酯基，为疏水性吸附。该树脂的比表面积和孔径较大，适合于吸附各类具有一定疏水性的成分，吸附量较大，洗脱容易，吸附动力学性能良好。对热、有机溶剂和一般使用条件下的酸、碱稳定，因此使用寿命较长。对蛋白、糖类、无机酸、碱、盐、小分子亲水性有机物均不吸附，从而达到分离目的。[0013]本发明葡蟠提取物中总黄酮含量为0.9-57%。[0014]本发明葡蟠提取物在美白和抗衰老方面都具有很好的功效，可以作为活性成分添加到化妆品配方中，这里所指的活性成分在某些情况下可以提供一种或一种以上的功效。[0015]本发明葡蟠提取物可应用于皮肤外用剂、保健食品和医药，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。具体实施方式[0016]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。[0017]实施例1:提取溶剂乙醇的浓度选取[0018]1、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以纯水200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成0.05mgml的溶液备用。[0019]2、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度30%的乙醇溶液200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0020]3、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0021]4、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度95%的乙醇溶液200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0022]将上述4种配制好的溶液分别进行自由基清除作用的试验。[0023]试验原理:根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性，当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量研究，来检测自由基清除情况，从而判断样品是否具有抗氧化能力。[0024]试验方法：将不同待测样品溶液2ml加入试管中，再加入2ml76ymolLDPPH乙醇溶液，混匀，室温下避光在黑暗处反应60min。在525nm处测定吸光度Abs。每个浓度重复三次，取平均值作为拟合数据，以保证实验结果的准确性。[0025]清除率I%=[卜T-ToAC-Co]X100%[0026]式中：To:2ml水或DMS0加2mlDPPH溶液的吸光度；[0027]T:2ml样品液加2mlDPPH溶液的吸光度；[0028]0:21111水或0130加2111195%乙醇的吸光度；[0029]C:2ml样品液加2ml95%乙醇的吸光度。[0030]按照上面公式计算清除率。试验结果如表1所示：[0031]表1[0033]由上表可见，当采用70%体积浓度的乙醇溶液为提取溶剂时，葡蟠提取物的清除自由基活性最好。[0034]实施例2:料液比的选取[0035]1、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液160ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0036]2、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0037]3、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液240ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0038]4、取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液300ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，获得葡蟠粗提物;取所得葡蟠粗提物配制成〇.〇5mgml的溶液备用。[0039]将上述4种配制好的溶液分别进行自由基清除作用的试验，试验方法同上。试验结果如表2所示：[0040]表2[0042]由上表可见，当采用70%体积浓度的乙醇溶液为提取溶剂且料液比为1:10时，葡蟠提取物的清除自由基活性最好。[0043]实施例3:葡蟠提取物的制备[0044]葡蟠粗提物的制备:取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末20g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液200ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液，减压回收溶剂至干，得葡蟠粗提物，用于功效研究。[0045]葡蟠活性富集提取物的制备:取葡蟠茎叶干燥粉碎后的粉末100g，室温下以体积浓度70%的乙醇溶液1000ml浸渍并超声提取2次，每次60min500W，过滤后合并滤液（约1800ml，减压回收溶剂至无醇味，过AB-8树脂，依次以30%乙醇，60%乙醇和90%乙醇洗脱，分别收集各流份（各约400ml，蒸干，分别得到葡蟠30%乙醇洗脱部位（5.16g、葡蟠60%乙醇洗脱部位2.04g和葡蟠90%乙醇洗脱部位0.77g，用于功效研究。[0046]实施例4:葡蟠提取物的自由基清除作用研究[0047]将实施例3制备的葡蟠粗提物、30%乙醇洗脱部位、60%乙醇洗脱部位和90%乙醇洗脱部位分别进行自由基清除作用的试验，试验方法同上。试验结果如表3所示：[0048]表3[0050]由上表可见，葡蟠的各种提取物对自由基均具有很好的清除自由基的作用，尤其是60%乙醇洗脱部位对自由基的清除作用最好。[0051]实施例5:葡蟠提取物的弹性蛋白酶抑制作用研究[0052]试验方法按照文献Am.J.Pharmacol.Toxicol·,2009,4,127-129中的方法进行，步骤为:在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-P-硝基酰替苯胺的0.1MTris-Cl缓冲溶液PH=8.0，在25°C下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液〇.5Uml，继续在25°C下温育60min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液，测定吸光度，通过与对照组的比较得到样品组的相对抑制率。试验结果见表4:[0053]表4[0055]由上表可见，葡蟠的各种提取物对弹性蛋白酶均具有很好的抑制作用，尤其是60%乙醇洗脱部位对弹性蛋白酶的抑制作用最好。[0056]实施例6:葡蟠提取物的酪氨酸酶抑制作用研究[0057]试验方法:在样品管和样品对照管中各加入lml不同浓度的样品溶液，阳性和阴性对照管以磷酸缓冲液代替。在样品管和阳性对照管中加入〇.5ml酪氨酸酶溶液酶活单位125uml，样品对照和阴性对照管以0.5ml磷酸缓冲液pH=6.8代替，振摇所有试管，使样品和酪氨酸酶充分混匀，37°C水槽孵育10分钟，加入2ml的0.03wt%酪氨酸溶液，反应10分钟，即刻在475nm处测定吸光度。[0058]抑制率I%=[1-Τ-Τ0AC-C0]X100%[0059]式中：TO:样品溶剂对照；[0060]T:样品对照；[0061]C:阳性对照；[0062]CO:阳性对照溶剂对照。[0063]试验结果如表5所示：[0066]由上表可见，葡蟠的各种提取物对酪氨酸酶均具有很好的抑制作用，尤其是60%乙醇洗脱部位对酪氨酸酶的抑制作用最好。[0067]实施例7:葡蟠提取物的总黄酮含量检测[0068]移取样品和芦丁对照各lmL于1OmL具塞试管中，加入lmL1%的三氯化铝甲醇溶液，用甲醇定容，摇勾，放置15min。同法制备空白液。在200~500nm波长范围内进行扫描，记录紫外可见吸收光谱。样品最大吸收峰和芦丁最大吸收峰的重合度好，因此选择芦丁为测定时的标准品。扫描结果显示于355nm处进行总黄酮含量测定。检测结果如表6所示：[0071]由上表可见，葡蟠的各种提取物中均含有一定的总黄酮，其中60%乙醇洗脱部位中的总黄酮含量最高。

权利要求：1.一种葡蟠提取物，其特征在于是以葡蟠为原料提取后获得，包括如下步骤：1将葡蟠原料浸渍入有机溶剂中，室温下超声提取后过滤，减压浓缩后获得葡蟠粗提物；2将所述葡蟠粗提物经过吸附树脂吸附和有机溶剂洗脱，干燥后获得葡蟠活性富集提取物，即为葡蟠提取物。2.根据权利要求1所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤（1和步骤（2中所述有机溶剂为水、甲酰胺、二甲基甲酰胺、三乙胺、三丁胺、乙腈、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲亚砜、丙酮、甲乙酮、二氧六环、吡啶、四氢呋喃、甲醇、乙醇溶液、醋酸纤维、三氯甲烷、丙三醇、丙二醇、丙烯二醇、异丙醇、正丁醇、乙醚中的一种或几种。3.根据权利要求2所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤⑴和步骤⑵中所述有机溶剂为乙醇溶液，体积浓度为0-95%。4.根据权利要求3所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤⑴中所述有机溶剂为体积浓度70%的乙醇溶液。5.根据权利要求3所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤⑵中洗脱时所用有机溶剂为体积浓度60%的乙醇溶液。6.根据权利要求1所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤⑴中葡蟠原料与有机溶剂的料液比为lg:8-15mL。7.根据权利要求5所述的葡蟠提取物，其特征在于：步骤⑴中葡蟠原料与有机溶剂的料液比为lg:10mL。8.根据权利要求1所述的葡蟠提取物，其特征在于：所述吸附树脂为弱极性或中等极性的吸附树脂，选自X-5、AB-8、D101、XDA-6、LX-21、NK-9、D3520或WLD。9.一种权利要求1所述的葡蟠提取物的用途，其特征在于:所述葡蟠提取物在制备美白药物、美白保健品或美白护肤品中的应用。10.-种权利要求1所述的葡蟠提取物的用途，其特征在于:所述葡蟠提取物在制备抗衰老药物、抗衰老保健品或抗衰老护肤品中的应用。

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