申请/专利权人：军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心

申请日：2020-04-24

公开（公告）日：2020-07-24

公开（公告）号：CN111440774A

主分类号：C12N5/10(20060101)

分类号：C12N5/10(20060101);C12N15/12(20060101);C12N15/62(20060101);C12N15/113(20100101);C12N15/90(20060101);C12Q1/02(20060101);C12R1/91(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.12.02#发明专利申请公布后的驳回;2020.08.18#实质审查的生效;2020.07.24#公开

摘要：本发明公开了一种稳定表达敲入EGFP的IFNGR2基因黑色素瘤B‑16细胞系的构建方法。本发明将绿色荧光蛋白EGFP基因序列敲入到细胞内IFNGR2基因的最后一个外显子末端，使其和IFNGR2基因融合表达。结果表明，EGFP的荧光强度与IFNGR2表达量成正相关可指示IFNGR2的表达水平，提示该细胞系可用于IFNGR2的表达调控研究。本发明为发现IFNGR2的表达调控因子和靶向肿瘤免疫的药物筛选提供有力工具。

主权项：1.一种细胞系的制备方法，包括如下步骤：利用CRIS-PITCh系统对B-16黑色素瘤细胞进行基因编辑，将绿色荧光蛋白EGFP的编码基因插入B-16黑色素瘤细胞中IFNGR2基因的第七外显子末端，使所述绿色荧光蛋白EGFP的编码基因与IFNGR2基因融合表达；所述CRIS-PITCh系统包括sgRNA表达盒；所述sgRNA的靶序列为如下a1或a2：a1SEQIDNO.1自5’端第15881-15903位；a2SEQIDNO.1自5’端第15936-15958位。

全文数据：

权利要求：

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